人包皮來源成纖維細胞支持小鼠胚胎干細胞自我更新和疾病患者誘導(dǎo)多能干細胞的研究.pdf

1、本論文利用體外培養(yǎng)的多能干細胞(pluripotentstemcells)，進行了以下兩個部分的研究:
　?。ㄒ唬┤税碓闯衫w維細胞(humanforeskinfibroblast，HFF)分泌白細胞介素6(interleukin6，IL6)支持小鼠胚胎干細胞（embryonicstemcell,ES細胞）自我更新的研究。
　　胚胎干細胞具有無限自我更新和多向分化潛能兩大特征，成為研究哺乳類動物早期發(fā)育分子機制和進行藥物篩

2、選的理想細胞模型。同時，它們是細胞治療所需功能細胞的無限來源。然而，實現(xiàn)ES細胞的這些應(yīng)用潛能需要穩(wěn)定、優(yōu)化的ES細胞培養(yǎng)體系。在目前普遍采用的小鼠ES細胞培養(yǎng)體系中，除需要白血病抑制因子(leukemiainhibitoryfactor，LIF)外，ES細胞生長在經(jīng)特殊處理的小鼠胚胎成纖維細胞(mouseembryonicfibroblast，MEF)上。因此，頻繁的MEF原代分離培養(yǎng)和價格不菲的LIF使ES細胞培養(yǎng)變得繁瑣和昂貴。在

3、本研究中，我們發(fā)現(xiàn)HFF能夠在不添加外源LIF的情況下支持小鼠ES細胞的生長及建系。與MEF不同，HFF能夠在體外長期傳代培養(yǎng)并保持其本身特性不變，避免了頻繁的原代分離培養(yǎng)。利用HFF進行小鼠ES細胞的培養(yǎng)不需要外源LIF，使得培養(yǎng)體系高效，穩(wěn)定和經(jīng)濟。我們在探索HFF不依賴外源LIF支持小鼠ES細胞生長的機制時，發(fā)現(xiàn)HFF通過分泌高水平的IL6，激活JAK-Stat3信號通路，實現(xiàn)支持小鼠ES細胞自我更新的功能。
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4、綜合癥(KlinefelterSyndrome，KS)和阿爾茨海默病(Alzheimer'sDisease，AD)疾病患者來源誘導(dǎo)多能干細胞（inducedpluripotentstemcells，iPS細胞）的研究
　　iPS細胞是在確定的體細胞重編程因子作用下，由分化的體細胞去分化而來的多能干細胞。與胚胎干細胞相似，iPS細胞具有無限自我更新和多向分化潛能。因此iPS細胞，特別是疾病患者體細胞來源的iPS細胞具有為研究相關(guān)疾病

5、提供體外疾病細胞模型的潛能。
　　KS是一種性染色體遺傳的常見疾病，患者臨床表現(xiàn)為先天性的睪丸發(fā)育不全。目前，由于實驗材料的缺乏，其發(fā)病機制尚不清楚，導(dǎo)致有效治療手段的缺乏。在本研究中，我們建立了四株KS患者包皮成纖維細胞來源的iPS細胞系。這些細胞符合iPS細胞的國際鑒定標(biāo)準(zhǔn)。同時，KS-iPS細胞具有向生殖譜系分化的潛能。在KS-iPS細胞中，一條X染色體發(fā)生了滅活。通過轉(zhuǎn)錄組的分析，我們發(fā)現(xiàn)在KS-iPS細胞中與KS患者臨床

6、癥狀相關(guān)基因的異常表達。因此，我們的研究表明KS-iPS細胞可以作為研究KS疾病的潛在的細胞模型。
　　AD是影響老年人健康的最主要的神經(jīng)退行性疾病之一，目前尚無非常有效的治療方法。我們建立了兩個攜帶有Presenilin1基因突變的家族性AD患者體細胞來源的iPS細胞，目前正在按照國際標(biāo)準(zhǔn)對其進行鑒定并檢測它們是否能作為研究AD疾病的體外模型。
　　以上研究為優(yōu)化多能干細胞體外培養(yǎng)體系和利用疾病iPS細胞探索疾病發(fā)生機制及