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文檔簡介
1、研究目的:觀察高脂飼養(yǎng)大鼠在胰島素抵抗形成的前期(一共六個時段)肝臟、骨骼肌、脂肪及胰島內(nèi)胰島素受體(IRc)及其底物-1(IRS-1)的表達量及其酪氨酸磷酸化水平的變化,探討胰島自身的胰島素抵抗與各外周組織胰島素抵抗的差異及時相關(guān)系。 實驗對象及方法:60只wistar大鼠,隨機分為高脂組和正常飼料對照組,每組30只,同期喂養(yǎng),分為6個時段,分別為喂養(yǎng)1、2、4、6、8、12周六個亞組,每亞組5只。各亞組在其喂養(yǎng)期滿后,立即于
2、禁食14h,麻醉后取尾靜脈血測血糖,開腹后門靜脈采血分別注入抗凝及不抗凝管中,經(jīng)離心后取血清和血漿,檢測包括胰島素、甘油三酯、膽固醇、FFA等指標,然后注入胰島素后分別于30、90、100、120秒取大鼠的肝臟、骨骼肌、脂肪組織和胰腺組織,并于液氮保存,待標本收集齊后,采用免疫沉淀和免疫印跡方法測得各組織IRc、IRS-1的量及其酪氨酸磷酸化水平,并通過圖像處理,分析灰度得出數(shù)值。所有標本結(jié)果以均數(shù)±標準差表示。每一亞組均與同期對照組比
3、較作統(tǒng)計分析。 結(jié)果:1、在IRc環(huán)節(jié),高脂鼠肝臟和胰島的IRc均在第1周末即明顯少于正常鼠;而受體酪氨酸磷酸化水平,肝臟在第1周末明顯低于正常對照,胰腺在第2周末才出現(xiàn)低于正常。高脂鼠骨骼肌和脂肪組織IRc數(shù)量變化不大,但其酪氨酸磷酸化水平變化明顯。骨骼肌IRc表達在第6周末明顯低于正常,但其酪氨酸磷酸化水平在第1周即有明顯減少,脂肪IRc在12周末時才出現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的減少,但其酪氨酸磷酸化水平在第2周即有明顯減少。
4、 2、在IRS-1環(huán)節(jié),高脂鼠肝臟IRS-1從第1周末開始即明顯低于正常,其酪氨酸磷酸化水平第2周末方出現(xiàn)差異;胰島IRS-1水平明顯降低是從第2周末開始的,而其酪氨酸磷酸化水平僅在第12周末才出現(xiàn)差異;骨骼肌IRS-1在第4周才出現(xiàn)明顯減少,而其酪氨酸磷酸化水平在第1周末即有明顯差異;脂肪組織IRS-1從第2周開始即出現(xiàn)明顯減少,但其酪氨酸磷酸化水平在整個實驗過程中并無明顯減少。 3、高脂喂養(yǎng)大鼠的四種組織,在胰島素抵抗的形成
5、過程中,在IRc和IRS-1及其酪氨酸磷酸化的這四個水平,都表現(xiàn)出隨時間先減少然后短暫部分或全部恢復(fù),最后再逐漸減少,并維持于一個非常低的水平這樣的趨勢。 結(jié)論:1、高脂飼養(yǎng)大鼠在飼養(yǎng)8周以后體重明顯高于正常,全身肥胖形成,同時伴高胰島素血癥、高膽固醇、高甘油三酯血癥、高游離脂肪酸血癥。在飼養(yǎng)12周末時,已形成穩(wěn)定的胰島素抵抗模型。 2、胰島素抵抗的形成過程中,各個組織在同一時段對不同的信號分子表現(xiàn)不一樣,對同一信號分子
6、,各組織發(fā)生胰島素抵抗的時間也不一樣,有先有后。即胰島素抵抗具有組織差異(組織不均一性)及時相差異(發(fā)生時間的先后)的。在IRc水平,時間順序為:胰島=肝臟(1w)>骨骼肌(6W)>脂肪(12W);在IRc酪氨酸磷酸化水平,肝臟=骨骼肌(1W)>胰島=脂肪(2w);在IRS-1水平,肝臟(1w)>胰島=脂肪(2w)>骨骼肌(4w);在IRS-1酪氨酸磷酸化水平,骨骼肌(1w)>肝臟(2w)>胰島(12W)>脂肪(無明顯差異)。
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