骨形態(tài)發(fā)生蛋白2對(duì)慢性腱病大鼠髕腱來(lái)源的肌腱干細(xì)胞體外成骨、成軟骨分化的作用.pdf

1、目的:研究體外骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)對(duì)膠原酶誘導(dǎo)的大鼠慢性腱病模型髕腱來(lái)源肌腱干細(xì)胞(rPTDSCs)的成骨、成軟骨分化的作用。
　　方法:從大鼠慢性腱病模型的髕腱中分離培養(yǎng)出原代肌腱干細(xì)胞(rPTDSCs)，體外顯微鏡下觀察原代細(xì)胞形態(tài)。將細(xì)胞傳代培養(yǎng)至第三代(P3)，行成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定其干細(xì)胞的特性。將rPTDSCs(P3)單層培養(yǎng)至細(xì)胞融合，實(shí)驗(yàn)組用重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（rhBMP-2）干預(yù)，對(duì)照組

2、不進(jìn)行干預(yù)。7天后分別行茜素紅染色，并行茜素紅染色定量分析。將rPTDSCs(P3)體外行三維微球(pellet)培養(yǎng)后分為兩組，實(shí)驗(yàn)組用rhBMP-2干預(yù)，對(duì)照組不進(jìn)行干預(yù)。21天后將微球(pellet)做石蠟切片并行蘇木精-伊紅染色，阿利辛藍(lán)染色以及Sox9和Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色。
　　結(jié)果:慢性腱病大鼠髕腱來(lái)源原代rPTDSCs體外培養(yǎng)呈克隆樣集落生長(zhǎng)，傳代后，細(xì)胞體外增殖速度較快，細(xì)胞形態(tài)主要表現(xiàn)為多突的紡錘形和星形的

3、扁平細(xì)胞，具有成纖維細(xì)胞樣的特征。rPTDSCs(P3)成骨誘導(dǎo)7天，茜素紅染色陽(yáng)性;成脂誘導(dǎo)10天，油紅O染色陽(yáng)性;成軟骨誘導(dǎo)14天，蘇木精-伊紅染色染色陽(yáng)性可見(jiàn)軟骨樣細(xì)胞，Ⅱ型膠原免疫組化染色陽(yáng)性。單層培養(yǎng)的rPTDSCs用rhBMP-2誘導(dǎo)7天，實(shí)驗(yàn)組的茜素紅染色陽(yáng)性，可見(jiàn)大量在細(xì)胞質(zhì)中沉積的鈣化灶，對(duì)照組為陰性，茜素紅染色定量檢測(cè)顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。rhBMP-2體外成軟骨誘導(dǎo)rPTDSCs21天，實(shí)驗(yàn)組微球的蘇木精-伊紅染色