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1、目的:觀察姜黃素對脂肪變性人肝HL-7702細(xì)胞甘油三酯沉積及乙酰CoA羧化酶(ACC)mRNA表達(dá)的影響。 方法:采用隨機(jī)對照研究,以離體人肝HL-7702細(xì)胞為研究對象。用10%(V/V)醫(yī)用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝HL-7702細(xì)胞24小時(shí),制備肝細(xì)胞脂肪變性模型。實(shí)驗(yàn)分為6組:第1組為空白對照,即正常肝細(xì)胞組;第2組為脂變肝細(xì)胞組;第3組至第6組在脂變細(xì)胞中分別加入不等
2、量姜黃素,使姜黃素終濃度分別為12.5μmol/L、 25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L。每組加藥后繼續(xù)孵育24小時(shí)。油紅O染色觀察每組細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況,高效液相色譜法(HPLC)檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法檢測每組肝細(xì)胞乙酰CoA羧化酶mRNA水平的表達(dá)。根據(jù)姜黃素改善細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的情況,作出量效關(guān)系。然后以姜黃素100μmol/L濃度分別孵育模型組細(xì)胞6h,12h,24h,4
3、8h,使用上述觀察方法,確定姜黃素改善細(xì)胞脂肪變性的最佳時(shí)間,作出時(shí)效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,以P<0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果:用10%脂肪乳注射液孵育人肝HL-7702細(xì)胞24小時(shí)后,油紅O染色后倒置顯微鏡下可觀察到HL-7702細(xì)胞脂肪變性,胞漿內(nèi)充滿大量被油紅O紅染的脂滴,且高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增加(P<0.01),示脂變肝細(xì)胞模型成功建立。加入不同濃
4、度的姜黃素(12.5μmol/L、 25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)處理24小時(shí)后, 油紅O染色見細(xì)胞內(nèi)脂滴較處理前減少,脂肪化程度減輕,高效液相色譜顯示細(xì)胞內(nèi)甘油三酯減少,與姜黃素呈劑量依賴性關(guān)系。RT-PCR顯示肝細(xì)胞脂肪變性后ACC的mRNA表達(dá)增強(qiáng),加入姜黃素處理后ACC的mRNA表達(dá)減弱,亦與姜黃素呈劑量依賴性關(guān)系。以姜黃素100μmol/L濃度為處理濃度,與脂變肝細(xì)胞共同孵育6,12,24小時(shí),結(jié)果顯
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