白念珠菌IPF14030基因敲除菌和高表達(dá)菌的構(gòu)建及功能研究.pdf

1、白念珠菌是一種重要的人類(lèi)條件致病菌。在系統(tǒng)性真菌感染病例中，白念珠菌感染占70％～80％，其死亡率高達(dá)30％～50％，而近十年來(lái)，臨床上耐藥菌株不斷增加，是臨床上真菌感染治療失敗的主要因?yàn)?。本文意在從基因水平上尋找新的多藥耐藥相關(guān)基因，為新一代抗真菌化合物提供靶標(biāo)，以克服真菌耐藥性。將未用藥物誘導(dǎo)的DSY1024與氟康唑和氟奮乃靜聯(lián)合誘導(dǎo)一個(gè)月后的DSY1024(產(chǎn)生高度耐藥表型)進(jìn)行表達(dá)譜芯片雜交，分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)IPF14030基因的m

2、RNA表達(dá)顯著增高，這提示：IPF14030基因可能與白念珠菌產(chǎn)生耐藥性相關(guān)。
　　 為了探明IPF14030在白念珠菌耐藥產(chǎn)生過(guò)程中發(fā)揮的作用，本文利用基因表達(dá)水平不同的菌株研究了IPF14030基因的功能。首先，采用Ura-B1aster基因敲除策略構(gòu)建了IPF14030基因缺失菌；并采用PCR方法和southern雜交方法確證了IPF14030基因敲除成功；其次，用含有強(qiáng)啟動(dòng)子MET3的白念珠菌高表達(dá)載體pCaEXP構(gòu)建了

3、IPF14030基因高表達(dá)菌，并用Real-time熒光實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證了IPF14030基因表達(dá)增高；最后，利用IPF14030基因敲除菌、親本菌、IPF14030基因高表達(dá)菌，從不同的基因表達(dá)水平考察了IPF14030基因?qū)ιL(zhǎng)曲線、藥物敏感性、菌絲形成和細(xì)胞內(nèi)ATP含量的影響。
　　 研究結(jié)果顯示：IPF14030基因?qū)Π啄钪榫L(zhǎng)曲線，益康唑、伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、活力康唑及特比奈芬的藥物敏感性、菌絲形成無(wú)顯著影響