半滑舌鰨Gadd45g基因的克隆、功能分析和染色體熒光原位雜交.pdf

1、半滑舌鰨是一種在我國廣泛養(yǎng)殖的經(jīng)濟魚類,本文以山東海陽工廠化養(yǎng)殖的半滑舌鰨為研究對象,利用多種分子生物學(xué)技術(shù)手段系統(tǒng)研究了半滑舌鰨Gadd45g基因的全長cDNA克隆,分析其基因序列的進化性,較為系統(tǒng)的研究了基因在半滑舌鰨組織和性腺發(fā)育中的表達,成功將基因定位于半滑舌鰨染色體上。這些基礎(chǔ)性的研究資料將填補半滑舌鰨Gadd45g基因研究的空白,為揭示半滑舌鰨的性別決定機制奠定了基礎(chǔ),對半滑舌鰨性別控制有積極地作用。
　　1半滑舌鰨G

2、add45g基因的克隆和功能分析
　　本研究根據(jù)半滑舌鰨全基因組測序結(jié)果,利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)和cDNA末端快速擴增(RACE)技術(shù),成功的在半滑舌鰨中克隆得到了3種Gadd45g基因的全長cDNA序列。Gadd45g1和Gadd45g2基因全長分別是1270bp和1181bp,都有480bp的開放閱讀框,分別編碼159個氨基酸殘基的蛋白,而Gadd45g3基因全長1147bp,編碼155個氨基酸。利用生物分

3、析軟件和網(wǎng)站對基因編碼的氨基酸進行比對分析,發(fā)現(xiàn)盡管他們均有保守結(jié)構(gòu)域,但Gadd45g1基因和Gadd45g2基因相似度高,與硬骨魚中的Gadd45g型基因及高等哺乳動物的Gadd45g基因有較近親緣關(guān)系,而Gadd45g3基因則與硬骨魚中的Gadd45g-like型基因有較相似。利用熒光實時定量 PCR技術(shù)對半滑舌鰨各組織中的3種Gadd45g基因的表達進行了分析,發(fā)現(xiàn)Gadd45g1基因只在雌魚中表達,且在肝臟表達最高,其次為性腺

4、;Gadd45g2基因在雌魚性腺表達最高,在雌魚其他組織及雄魚的所有組織均微量表達;Gadd45g3基因在雌雄魚的腦中表達最高。對比雌、雄和偽雄魚的性腺中3種基因的表達,發(fā)現(xiàn)Gadd45g1和Gadd45g2基因在半滑舌鰨雌魚性腺中表達高,在雄魚和偽雄魚中表達低;Gadd45g3基因在雄魚和偽雄魚的性腺中高表達,在雌魚性腺中表達低。在半滑舌鰨仔魚的性腺發(fā)育各時期,對3個基因的表達研究發(fā)現(xiàn),Gadd45g1基因在50d即半滑舌鰨性腺即將分

5、化的時期表達相對較高,該基因可能是半滑舌鰨性別決定的關(guān)鍵基因;Gadd45g1和Gadd45g2在95d后的雌魚性腺中均有較高表達,暗示他們在卵巢發(fā)育中有重要作用;Gadd45g3在20d雄魚性腺中表達高,隨后降低,它對半滑舌鰨雄性性別的影響可能早于性腺分化時期,且在精巢和卵巢發(fā)育早期有較高表達。
　　2半滑舌鰨Gadd45g基因的染色體熒光原位雜交
　　對上述克隆得到的3種Gadd45g基因進行BAC文庫篩選,成功找到含有