對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是迄今為止對全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)危害最為嚴(yán)重的一種對蝦病毒，自1987年以來，我國臺灣地區(qū)在世界范圍內(nèi)首次發(fā)生養(yǎng)殖的斑節(jié)對蝦大規(guī)模死亡的事件之后，短短10余年，對蝦白斑綜合癥席卷了全球的對蝦養(yǎng)殖地區(qū)，給世界對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了不可估量的損失，弄清其流行傳播機理是有效防治的基礎(chǔ)。 本實驗使用PCR(polymerase chain reaction)及套式PC

2、R的方法在基因水平上對WSSV分子流行病學(xué)進(jìn)行了研究。即以凡納濱對蝦樣品中所攜帶的WSSV為實驗對象，提取其基因組，用DNA保守區(qū)段所設(shè)計的引物對(E4)進(jìn)行套式PCR擴增，以確定采樣獲得的對蝦樣品是否感染有WSSV。隨后以GeneBank中所發(fā)布的在中國廈門發(fā)現(xiàn)的WSSV株型的(WSSV-CH)的DNA全序列(GeneBank Accession No：AF332093)為標(biāo)準(zhǔn)，與另外2個株型中國臺灣株(WSSV-TW)和泰國株(WS

3、SV-TH)進(jìn)行全序列比對，運用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計出11對DNA非保守區(qū)段的特異性引物(P1-P11)，經(jīng)PCR擴增后，運用瓊脂糖凝膠電泳方法和DNAstar，BioEdit，Clustalx1.83等DNA序列分析軟件處理實驗結(jié)果，綜合分析后確定出實驗樣品所攜帶的WSSV的株型，為了解WSSV的來源和傳播途徑，更好地預(yù)防和治療對蝦白斑綜合癥提供依據(jù)。 本實驗連續(xù)對2005年廣東省境內(nèi)的肇慶市、江門市、

4、廣州市、珠海市、陽江市、茂名市、揭陽市、惠州市、汕頭市和汕尾市這10個地市所獲得的191批凡納濱對蝦樣品和2006年廣東省境內(nèi)的肇慶市、江門市、珠海市、陽江市、茂名市、揭陽市、惠州市和汕頭市這8個地市所獲得的196批次凡納濱對蝦樣品中，運用E4引物對進(jìn)行PCR檢測，普查結(jié)果發(fā)現(xiàn)一擴陽性樣品分別為2例和12例，陽性率為1.05﹪和6.09﹪，一擴陽性率低，顯示了這個結(jié)果與所取樣的養(yǎng)殖塘基本上未發(fā)病的情況是一致的；二擴陽性樣品分別為167例

5、和177例，陽性率達(dá)到82.2﹪和89.8﹪，顯示在養(yǎng)殖對蝦中，WSSV攜帶率很高。首次應(yīng)用11對特異引物對對中國華南地區(qū)凡納濱對蝦養(yǎng)殖密集的福建省、廣東省、廣西壯族自治區(qū)和海南省所采的對蝦樣品進(jìn)行WSSV的DNA PCR檢測，并測序分析，經(jīng)序列比對發(fā)現(xiàn)，在廣東省、廣西壯族自治區(qū)、海南省所采樣品測得的這11段序列，基本上相同，而且與WSSV-TH一致，而在福建省所采樣品，測得的這11段序列與其它地區(qū)均不同而與WSSC-CH相似，由此可推