膠原酶濃度及消化時間對大鼠胰島細胞分離的影響.pdf

1、糖尿病是一種危害人類健康的重要疾病。胰島移植是新近發(fā)展起來的一種具有顯著優(yōu)勢的替代胰腺內(nèi)分泌功能的技術(shù)。由于胰島在分離純化后所得的細胞數(shù)量過少，使這項技術(shù)始終未得到廣泛應用，因此提高胰島分離純化效果，獲取足夠數(shù)量和高質(zhì)量胰島細胞成為胰島移植技術(shù)成敗的關(guān)鍵。目前動物實驗中普遍應用膠原酶V進行胰島細胞的分離，本文根據(jù)傳統(tǒng)的組織切碎消化技術(shù)及改良型靜止消化技術(shù)對大鼠胰島細胞分離技術(shù)進行探討，針對不同濃度和同一濃度條件下不同時間點膠原酶分離所獲

2、得胰島細胞的效果進行分析比較，為胰島細胞分離技術(shù)中最關(guān)鍵的膠原酶使用方案提供一個可行的標準化方案。 方法：將32只SD大鼠分為兩部分。第一部分為時間實驗，取16只大鼠分4組(T1、2、3、4)，每組4只，采用0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L四種濃度的膠原酶對胰腺進行消化，消化過程中每隔10分鐘取定量細胞懸液行DTZ染色觀察，確定各濃度最佳消化時間點。第二部分為濃度實驗，另16只大鼠以同樣方法分4組(C1、2

3、、3、4)，每組4只，按已確定的時間點消化，分離后采用間斷密度梯度離心法純化胰島，DTZ染色計數(shù)，AO-PI熒光染色分析存活率，確定膠原酶最佳濃度。 將18只昆明小鼠分為A、B、C 3組，A、B組腹腔注射STZ建立糖尿病模型，對B組成模小鼠進行腎被膜下胰島細胞移植，尾靜脈采血監(jiān)測記錄各組小鼠血糖變化值。C組為對照組。 結(jié)果：各濃度組最佳消化時間：T1組50分鐘，T2組40分鐘，T3組和T4組為30分鐘。不同濃度條件下分離

4、純化后胰島細胞數(shù)量為：C1組180.00±73.48個，C2組473.00±97.74個，C3組552.75±69.25個，C4組416.50±138.95個。分離純化后回收率比較，C1獲取細胞量最少(P<0.01)。熒光染色分析存活率比較，C4組活力最低(P<0.01)。12只小鼠中有7只(58.3％)成模。對B組4只成模小鼠進行胰島細胞移植后3只(75％)血糖次日內(nèi)恢復正常。未使用免疫抑制藥物的情況下，1只小鼠移植后維持正常血糖達2