玻璃化冷凍保存對(duì)大鼠胰島細(xì)胞的影響.pdf

1、目的： 探討玻璃化冷凍保存對(duì)大鼠胰島細(xì)胞的影響以及通過玻璃化冷凍保存的方法建立胰島細(xì)胞庫；且將二甲基亞砜、乙二醇與甲酰胺按照不同比例聯(lián)合應(yīng)用，觀察其對(duì)大鼠胰島細(xì)胞的影響。選取優(yōu)化方案及對(duì)其可能機(jī)制探討。 方法： 將分離純化的的胰島細(xì)胞制備為懸液，檢測(cè)其純度合格(>60％)后。將懸液分為四組：A組為新鮮胰大鼠島細(xì)胞組，作為對(duì)照組，觀察經(jīng)冷凍保存復(fù)溫后的大鼠胰島細(xì)胞相對(duì)新鮮組的變化。B組方案10％(V/V)DMSO+

2、10％(V/V)乙二醇，C組方案10％(V/V)DMSO+10％(V/V)乙二醇+10％(V/V)甲酰胺，D組方案20％(V/V)DMSO+20％(V/V)乙二醇+10％(V/V)甲酰胺。將B、C、D組使用玻璃化冷凍方法保存，即將胰島細(xì)胞與冷凍保護(hù)劑混勻后，直接投入液氮中保存，分別于7d、14d后在37℃快速復(fù)溫。經(jīng)不同濃度蔗糖液、Hanks液分級(jí)移出冷凍保護(hù)劑后，含10％(V/V)胎牛血清RPMl1640培養(yǎng)。置培養(yǎng)瓶于37℃、95％

3、O2、5％CO2恒溫培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。通過AO-PI染色，熒光顯微鏡下，通過計(jì)數(shù)染色細(xì)胞計(jì)算胰島細(xì)胞的活率，間接反應(yīng)胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性。采用ELISA方法檢測(cè)胰島素分泌情況，觀察胰島細(xì)胞的功能。綜合二項(xiàng)指標(biāo)評(píng)價(jià)玻璃化冷凍保存方法。 結(jié)果： (1)胰島細(xì)胞的純度79.6％：(2)胰島細(xì)胞活率的比較：B組、D組與A組比較P<0.05，按照a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，B組、D組與A組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C組與A組比較P>0.05，按照

4、a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，認(rèn)為二組之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C組內(nèi)不同時(shí)間段比較P>0.05，按照a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，認(rèn)為二者之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；(3)胰島素分泌量的比較：B組、D組與A組比較P<0.05，按照a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，B組、D組與A組存在差異。C組與A組比較P>0.05，按照a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，認(rèn)為二組之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。C組內(nèi)不同時(shí)間段比較P>0.05，按照a=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，認(rèn)為二者之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：