自體口腔黏膜上皮細胞培養(yǎng)眼表重建的實驗研究.pdf

1、目的：將自體培養(yǎng)的口腔黏膜上皮植片移植于重度堿燒傷后角膜緣功能完全缺損的動物眼表，分期觀察上皮恢復(fù)情況及其新生血管的生長情況，為該組織工程重建眼表的方法早日投入臨床使用提供可靠的實驗基礎(chǔ)。 方法：取6月齡健康家白兔54只，體重(2.5±0.2)kg，對所有家兔行單眼燒傷，制備重度堿燒傷模型．，然后隨機分為A、B、C三組，每組18只，雌雄不拘。A組為對照組不行移植；B組為單純羊膜移植組；C組為自體培養(yǎng)的口腔黏膜細胞移植組。術(shù)后每日

2、在裂隙燈下觀察角膜上皮染色、角膜混濁度以及新生血管生長情況并進行評分；并利用圖像分析系統(tǒng)測定角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)長度，計算CNV面積；每組在術(shù)后1w、2w、4w分別隨機處死6只家兔，摘取角膜作病理切片，HE染色觀察角膜各層結(jié)構(gòu)，利用Image pro plus6.0圖象分析系統(tǒng)測量角膜微血管數(shù)量；免疫熒光法檢測血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial fact

3、or，VEGF)表達；利用印跡細胞技術(shù)觀察角膜上皮重建情況。 結(jié)果：自體體外培養(yǎng)的兔口腔黏膜細胞可在角膜基質(zhì)上繼續(xù)增殖、分化為密集的上皮細胞層；移植后1、2、4w各個時間點分別比較三組角膜上皮染色、混濁度以及新生血管生長情況并進行評分，A、B兩組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P值分別為：0.097、0.505、0.309)，A組與C組比較，B組與C組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。移植術(shù)后第2w比較CNV面積及血管計數(shù)，A組

4、B組比較差異沒有統(tǒng)計學意義(面積P=0.518、血管計數(shù)P=0.072)，A組與C組比較，B組與C組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。移植術(shù)后第1w對VEGF的表達進行比較，三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中C組(口腔黏膜上皮細胞移植組)總評分均數(shù)最少、CNV面積最小，微血管計數(shù)最少、VEGF陽性表達量最少。印跡細胞檢查：A、B組角膜上皮均發(fā)現(xiàn)杯狀細胞，C組角膜上皮未發(fā)現(xiàn)杯狀細胞。 結(jié)論： 1．