兔口腔黏膜上皮干細胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的初步研究.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文兔口腔黏膜上皮干細胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的初步研究姓名：張嵐申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：李冰20080504山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目的：組織工程技術(shù)首先要獲取干細胞為種子細胞體外培養(yǎng)。獲取足量干細胞并維持其生物學(xué)特性是我們研究的重點。方法：利用Ⅳ型膠原對干細胞快速黏附特性，將口腔黏膜上皮干細胞從上皮細胞單細胞懸液初步篩選出，進行體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性觀察，同時利用上皮干細胞相對特異標識物P63加以鑒定

2、。結(jié)果：篩選細胞在體外呈克隆性生長：P63陽性表達，顯示所篩選細胞為上皮干細胞。本部分獲得處于良好生長狀態(tài)的口腔黏膜干細胞，為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)。第三部分兔口腔黏膜上皮干細胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜目的：探尋兔口腔黏膜上皮干細胞培養(yǎng)構(gòu)建組織工程黏膜的方法。方法：用本實驗設(shè)計的組織工程黏膜培養(yǎng)系統(tǒng)，以口腔黏膜上皮干細胞為種子細胞，以去上皮羊膜為支架，體外構(gòu)建組織工程上皮膜片，同時以兔角膜上皮為對照組。常規(guī)HE染色和透射電鏡觀察上皮膜片的形態(tài)和細

3、胞結(jié)構(gòu)，并同時檢測上皮膜片細胞K3(上皮角化特異標識物)和P63(上皮干細胞相對特異性標識物)的表達。結(jié)果：口腔黏膜上皮干細胞可以在去上皮羊膜上形成無角化的類角膜上皮結(jié)構(gòu)，并且底層存在上皮干細胞，超微結(jié)構(gòu)符合上皮組織特點，表明口腔黏膜上皮干細胞可以在體外成功構(gòu)建組織工程上皮膜片，同時仍保留一定的上皮干細胞，有利于損傷部位結(jié)構(gòu)及功能的修復(fù)。綜上所述，我們以去上皮羊膜為載體，用DefinedKSFM做培養(yǎng)液，采用氣液界面培養(yǎng)方式，培養(yǎng)獲得的