缺血后適應(yīng)的干預(yù)時(shí)間及循環(huán)次數(shù)對(duì)家兔短期缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的： 心肌的缺血再灌注后,會(huì)出現(xiàn)心肌的缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury; IRI),直接影響到患者的預(yù)后?，F(xiàn)在已經(jīng)證實(shí)缺血后適應(yīng)(Ischemic postconditioning,Ipost)可以有效的減輕IRI。近期的研究顯示缺血后適應(yīng)是否能發(fā)揮心肌保護(hù)作用,減少心肌細(xì)胞凋亡，還有兩個(gè)最關(guān)鍵的影響因素: 短暫缺血/復(fù)灌的持續(xù)時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。本研究通過(guò)TUNEL法觀察心肌細(xì)胞凋亡情況及免疫組化法

2、觀查誘導(dǎo)凋亡基因Bax及抗凋亡基因Bcl-2的變化情況。探討家兔缺血后適應(yīng)不同的干預(yù)時(shí)間和循環(huán)次數(shù)對(duì)心肌缺血再灌注后心肌細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法： 66只新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)一大組和二大組。其中實(shí)驗(yàn)一大組36只家兔隨機(jī)分為6組(n=6)；假手術(shù)對(duì)照組(S1組)、缺血/再灌注對(duì)照組(IR1組)、缺血后適應(yīng)組(Post1-4組)。除S1組外，其余5組均接受左冠脈前降支15min阻斷和30min再灌注，Post1-4組在15m

3、in缺血后分別接受連續(xù)3次缺血/再灌注10s、15s、30s及45s的后適應(yīng)。實(shí)驗(yàn)二大組30只家兔隨機(jī)分為5組(n=6)；假手術(shù)對(duì)照組(S2組)、缺血/再灌注對(duì)照組(IR2組)、缺血后適應(yīng)組(Post5-7組)。除S2組外，其余5組均接受左冠脈前降支15min阻斷和30min再灌注，Post5-7組在15min缺血后分別接受缺血/再灌注各30s的1次、2次及3次循環(huán)的后適應(yīng)干預(yù)。取各組缺血再灌注區(qū)心肌組織行HE染色光鏡觀察各組組織學(xué)特點(diǎn)

4、、TUNEL分析檢測(cè)兔短期缺血再灌注心肌組織的細(xì)胞凋亡情況、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一大組：TUNEL檢測(cè)：⑴除S1組外各組均出現(xiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。⑵凋亡指數(shù)Post1-4組顯著低于IR1組（P<0.01）。⑶Post1-4組間兩兩比較，Post3組與Post1組、Post2、Post4組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Post1、Post2、Post4組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。Bcl

5、-2,Bax蛋白免疫組織化學(xué)結(jié)果：⑴ 所有組均有Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)。⑵ S1組、IR1組和Post1-4組Bcl-2表達(dá)水平之間均有顯著差異（P<0.05)。⑶各組間兩兩比較，Post1-4各組Bcl-2蛋白表達(dá)高于IR組(P<0.05)， Post3組Bcl-2蛋白表達(dá)高于Post1組、Post4組（P<0.05)，另外缺血后適應(yīng)Post1、Post2、Post4組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑷S1組、IR1組和Post1-4組Ba

6、x表達(dá)水平之間均有顯著差異（P<0.05)。⑸組間兩兩比較Post1-4各組Bax蛋白表達(dá)低于IR1組（P<0.05)， Post3組Bax蛋白表達(dá)低于Post1組、Post2、Post4組（P<0.05)，但與S1組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，另外缺血后適應(yīng)Post1、Post2、Post4組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 實(shí)驗(yàn)二大組：TUNEL檢測(cè)：⑴除S2組外各組均出現(xiàn)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。⑵凋亡指數(shù)Post5-7組顯著低于IR2組（P

7、<0.01）。⑶Post5-7組間兩兩比較，Post7組與Post5組、Post6組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Post5組與Post6組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。Bcl-2,Bax蛋白免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：⑴ 所有組均有Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)。⑵S2組、IR2組和Post5-7組Bcl-2表達(dá)水平之間均有顯著差異（P<0.05)。 ⑶組間兩兩比較，Post5-7各組Bcl-2蛋白表達(dá)高于IR2組（P<0.05)， Post7組Bcl-2

8、蛋白表達(dá)高于Post5組、Post6組（P<0.05)，但Post5與Post6組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑷S2組、IR2組和Post5-7組Bax表達(dá)水平之間均有顯著差異（P<0.05)。⑸組間兩兩比較，S2組與Post6、Post7兩組Bax蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Post7組Bax蛋白表達(dá)低于Post5組(P<0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：⑴缺血后適應(yīng)的不同干預(yù)時(shí)間和不同的循環(huán)次數(shù)均可減少缺血再灌注心肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)；