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1、目的:本文擬研究LPS,腫瘤細(xì)胞壞死釋放物質(zhì)(NTC-Ms)對(duì)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響,并從分子水平探討其影響的可能機(jī)制,從而為腫瘤治療提供新的思路。
方法:(1)分別用LPS,NTC-Ms,以及Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 作用于B16細(xì)胞48h,粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)三組刺激因素分別對(duì)B16細(xì)胞粘附能力的影響。(2)分別用LPS,NTC-Ms,以及Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 作用于B1
2、6細(xì)胞48h,軟瓊脂遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)三組刺激因素分別對(duì)B16細(xì)胞遷移能力的影響。(3)分別用LPS,NTC-Ms,以及Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 作用于B16細(xì)胞48h,運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)(Transwell小室法)檢測(cè)三組刺激因素分別對(duì)B16細(xì)胞侵襲和趨化運(yùn)動(dòng)能力的影響。(4)分別用LPS,NTC-Ms,以及Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 作用于B16細(xì)胞48h,RT-PCR法檢測(cè)B16細(xì)胞TLR4,MMP-9 mRNA的表
3、達(dá)。(5)分別用LPS,NTC-Ms,以及Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 作用于B16細(xì)胞48h,明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)B16細(xì)胞分泌的MMP-9的活性。
結(jié)果:(1)LPS,NTC-Ms 刺激后,B16細(xì)胞粘附基底膜的能力均增強(qiáng);Resveratrol聯(lián)合NTC-Ms 刺激后,B16細(xì)胞對(duì)基底膜的粘附能力較單用NTC-Ms 減弱。(2)LPS,NTC-Ms 刺激后,遷移至軟瓊脂底面的B16細(xì)胞數(shù)均增多;Resvera
4、trol 聯(lián)合NTC-Ms 刺激后,遷移至軟瓊脂底面的B16細(xì)胞數(shù)減少。(3)LPS,NTC-Ms刺激后,B16細(xì)胞侵襲和趨化運(yùn)動(dòng)能力均增強(qiáng);Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 刺激后,B16細(xì)胞侵襲和趨化運(yùn)動(dòng)能力減弱。(4)LPS,NTC-Ms 刺激后,B16細(xì)胞TLR4,MMP-9 mRNA表達(dá)均上調(diào);Resveratrol 聯(lián)合NTC-Ms 刺激后,B16細(xì)胞TLR4,MMP-9 mRNA表達(dá)下調(diào);(5)LPS,NTC-Ms
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