核因子κB在急性髓細(xì)胞性白血病中調(diào)控多藥耐藥基因轉(zhuǎn)錄的研究.pdf

1、研究目的：多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)是人急性白血病化療失敗的主要原因，其發(fā)生機(jī)制很多，其中一個(gè)重要因素是mdr-1基因及產(chǎn)物P-glycoprotein(P-gp)表達(dá)。核因子κB(NF-κB)是一個(gè)普遍存在的核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞生存中發(fā)揮重要作用。近來(lái)發(fā)現(xiàn)NF-κB在mdr-1的表達(dá)調(diào)控中起重要作用，但僅限于在細(xì)胞系中，尚未見(jiàn)在原代腫瘤細(xì)胞中關(guān)于NF-κB在mdr-1表達(dá)調(diào)控中作用的研究。本

2、實(shí)驗(yàn)在初發(fā)急性髓細(xì)胞性白血病(AML)中篩選原發(fā)耐藥標(biāo)本，并在原發(fā)耐藥細(xì)胞中探討NF-κB在mdr-1轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用。 研究方法：初發(fā)AML病人骨髓或者外周血，單個(gè)核細(xì)胞分離，免疫細(xì)胞化學(xué)P-gp抗體染色檢測(cè)P-gp表達(dá)，流式細(xì)胞儀熒光染料羅丹明123(rhodamine123，Rho123)泵出實(shí)驗(yàn)檢測(cè)P-gp功能，兩者聯(lián)合篩選原發(fā)耐藥AML標(biāo)本。設(shè)立對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組加入蛋白酶抑制劑MG-1321.0μmol/L，培養(yǎng)

3、6h后NF-κBP65抗體染色，激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察NF-κB在細(xì)胞中分布，檢測(cè)其活性變化；real-timePCR方法檢測(cè)mdr-1mRNA；AnnexinV+7AAD雙標(biāo)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)MG-1321.0μmol/L處理6h、12h細(xì)胞凋亡。 研究結(jié)果：36例初發(fā)的AML中，同時(shí)滿(mǎn)足免疫細(xì)胞化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性和Rho123泵出實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性的原發(fā)耐藥標(biāo)本11例，占全部標(biāo)本30.6％。MG-132處理6h，NF-κB在細(xì)胞核中分布明顯

4、減少，活性明顯受抑，mdr-1mRNA水平明顯減少，對(duì)照組mdr-1mRNA是實(shí)驗(yàn)組4.3±2.3倍。MG-132處理12h細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡，平均存活率為49±9％，低于12h對(duì)照組細(xì)胞的平均存活率79±3％(P＜0.01)；MG-132處理6h細(xì)胞凋亡發(fā)生不明顯，平均存活率為82±5％，6h對(duì)照組細(xì)胞平均存活率為86±5％，兩組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；MG-132處理12h組細(xì)胞平均存活率49±9％明顯低于6h組82±5％(P＜