B16黑色素瘤高低轉移株篩選及其侵襲轉移的分子機制.pdf

1、該研究在用體內法篩選出B16M高低轉移株的基礎上,運用實驗性和自發(fā)性腫瘤轉移模型驗證所篩選的不同B16M細胞在體內生長、轉移情況.用細胞生物學手段如細胞增殖、<'3>H-TdR摻入實驗、流式細胞儀技術、細胞侵襲離散實驗研究了高低B16M細胞株體外增殖能力、細胞周期、對離散因子的反應及侵襲能力的差異.隨后用Northern雜交、RT-PCR、Western印跡、及凝膠酶譜分析技術研究了B16M高低轉移的分子機制.結果發(fā)現(xiàn),在所篩選出的三株

2、可疑高轉移B16M細胞株中,有一株(H3B16M)細胞在接種于同系C57BL/6體內所形成的原發(fā)瘤重量、血道和自發(fā)性肺轉移結節(jié)數(shù)明顯高于其他細胞株.說明H3B16M的生長、轉移能力最強.同時發(fā)現(xiàn)在相同的培養(yǎng)條件下,體外培養(yǎng)4-5d的H3B16M細胞數(shù)明顯多于其他細胞株,其<'3>H-TdR摻入最多,細胞周期中靜止期(S期)細胞明顯減少,G2-M期細胞增多.H3B16M還對SF的離散性反應明顯加強,透過聚碳酯膜的細胞明顯增加.也說明H3細

3、胞株體外的增殖、離散侵襲能力較強.機制探討時發(fā)現(xiàn)H3細胞上c-met、ETS、VEGFR在mRNA及蛋白水平上均表達增加.SF/c-met下游兩條主要信號轉導途徑中的兩個關鍵分子ERK、AKT磷酸化水平增強,基質金屬蛋白激酶(MMP2/9)活性明顯增強.實驗中也發(fā)現(xiàn)了IL-18、TEC、鈣磷脂結合蛋白1(ANNINEX1)在H3細胞株中表達增加,NM23表達減少的現(xiàn)象,提示可能因為c-met表達增加,其下游信號轉導途徑MAPK/PI3K