版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、背景:microRNAs(miRNAs)是一類在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)基因表達(dá)的非編碼小RNA分子,已有研究表明miRNAs與凋亡關(guān)系密切。anisomycin由鏈霉菌(Streptomyces griseolus)分泌,能與60S核糖體中亞單位28S rRNA結(jié)合并阻斷肽鍵形成,從而阻止肽鏈延長和導(dǎo)致多核糖體降解。此前本課題組已篩選并鑒定出在anisomycin誘導(dǎo)人類急性T淋巴細(xì)胞性白血病(Jurkat T)細(xì)胞凋亡中顯著差異表達(dá)的miRN
2、A let-7c。然而,let-7c被anisomycin刺激表達(dá)上調(diào)后,它是如何介導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡的以及與JNK通路是否存在關(guān)聯(lián)尚不清楚。
目的:深入闡明miRNA let-7c(let-7c)在anisomycin誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡中的作用與可能機(jī)制,以期為anisomycin臨床應(yīng)用于治療白血病提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:建立anisomycin體外誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡的模型。a
3、nisomycin處理細(xì)胞前加入JNK信號(hào)通路特異性阻斷劑SP600125,qPCR檢測(cè)let-7c的變化,以探明JNK信號(hào)與let-7c之間是否存在關(guān)聯(lián);通過分別轉(zhuǎn)染let-7c-mimic、let-7c-inhibitor和let-7c過表達(dá)載體,結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析let-7c在anisomycin誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡中的作用,用Western Blot觀察let-7c對(duì)凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AP-1、P-AP-1、STAT1、P
4、-STAT1、STAT3、P-STAT3和凋亡相關(guān)蛋白Bim、P-Bim、Bcl-xL、P-Bcl-xL表達(dá)的影響,以確定anisomycin是否通過let-7c影響這些凋亡相關(guān)因子;進(jìn)一步采用RT-PCR、qPCR和Western Blot確證let-7c與Bim和Bcl-xL的關(guān)聯(lián);再利用siRNA技術(shù)沉默Jurkat T細(xì)胞中的bim基因,結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)、qPCR和Western Blot確證Bim是否在let-7c介導(dǎo)aniso
5、mycin誘導(dǎo)Jurkat T細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用;最后,通過Western Blot和原位免疫熒光染色觀察Bim能否影響Jurkat T細(xì)胞中活化的Bax和Bak的表達(dá)與分布,以弄清Bim激活的下游分子及其作用。
結(jié)果:anisomycin顯著上調(diào)miRNA let-7c的表達(dá),但是這種作用可被JNK通路阻斷劑SP600125部分逆轉(zhuǎn)。anisomycin明顯增加Jurkat T細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞比例,轉(zhuǎn)染let-7c
6、-mimic或let-7c過表達(dá)載體均可發(fā)揮類似的促凋亡作用,而轉(zhuǎn)染let-7c-inhibitor可部分逆轉(zhuǎn)anisomycin誘導(dǎo)的凋亡。let-7c-mimic、let-7c過表達(dá)或anisomycin都能上調(diào)P-AP-1和P-STAT1蛋白水平,而 anisomycin的上調(diào)作用可被 let-7c-inhibitor部分逆轉(zhuǎn)。相反,P-STAT3表達(dá)被let-7c-mimic、let-7c過表達(dá)載體或anisomycin抑制,而
7、let-7c-inhibitor卻能逆轉(zhuǎn)anisomycin的抑制作用。同時(shí),無論anisomycin還是let-7c-mimic和let-7c-inhibitor均不改變非磷酸化的AP-1、STAT1和STAT3。 let-7c-mimic能夠上調(diào)Bim mRNA、蛋白和磷酸化水平,而下調(diào)Bcl-xL mRNA和蛋白水平,但不影響P-Bcl-xL的表達(dá)。低敲bim基因能明顯減少anisomycin誘導(dǎo)的Jurkat T細(xì)胞凋亡,抑制a
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- QIC1抑制EGFR-STAT3-HKⅡ信號(hào)通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究.pdf
- STAT3基因RNAi和杠柳苷誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡以及對(duì)STAT3信號(hào)通路的影響.pdf
- 白細(xì)胞介素17A通過Stat3-iNOS誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡.pdf
- IL-10通過JAK2-STAT3信號(hào)通路拮抗低氧誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞凋亡.pdf
- 血管緊張素(1-7)通過抑制JAK-STAT信號(hào)通路對(duì)抗高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷.pdf
- 日本腦炎病毒通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)IRE1-JNK信號(hào)通路誘導(dǎo)BHK-21細(xì)胞凋亡.pdf
- 混合皮膚移植中自體角朊細(xì)胞通過B7-H1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子GATA-3、p-STAT6及p-STAT3表達(dá)的相關(guān)研究.pdf
- 蓯蓉精水提物通過jak2stat3信號(hào)通路減輕mpp誘導(dǎo)的mes23.5神經(jīng)細(xì)胞凋亡
- STAT1-Caspase3信號(hào)通路誘導(dǎo)骨細(xì)胞凋亡在激素性股骨頭壞死中的作用機(jī)制研究.pdf
- HMGB1誘導(dǎo)大鼠胰腺腺泡細(xì)胞JAK2-STAT3信號(hào)通路活化的研究.pdf
- EGCG通過TGF-β1-STAT3信號(hào)途徑抑制惡性黑素瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化.pdf
- STAT1參與tmTNF-α通過TNFR1非DD結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究.pdf
- PI3K-Akt和JNK信號(hào)通路與AfMNPV誘導(dǎo)斜紋夜蛾SL-1細(xì)胞凋亡.pdf
- STAT3信號(hào)通路對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞VEGF、sFlt-1表達(dá)的影響.pdf
- 靶向STAT5的siRNA和杠柳苷誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡及對(duì)STAT5信號(hào)通路的影響.pdf
- DATS通過ROS活化MLK3-JNK誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡.pdf
- c-Abl通過磷酸化STAT1調(diào)控IFNγ應(yīng)答途徑.pdf
- 細(xì)胞衰老在TSLP通過Stat3信號(hào)通路誘導(dǎo)哮喘氣道重塑中的作用機(jī)制研究.pdf
- 全反式維甲酸通過調(diào)控JNK、AP-1信號(hào)通路抑制肝星狀細(xì)胞膠原的生成.pdf
- 弓形蟲通過STAT3-miR17~92-Bim信號(hào)通路調(diào)控人巨噬細(xì)胞凋亡的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論