巨噬細(xì)胞STAT3信號(hào)途徑在誘導(dǎo)乳腺癌免疫耐受中的作用.pdf

1、在惡性腫瘤微環(huán)境中，TAMs誘導(dǎo)免疫抑制、分泌促進(jìn)腫瘤增殖和浸潤的細(xì)胞因子、生長因子而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但是具有抗腫瘤免疫作用的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為促腫瘤作用的TAMs的機(jī)制還不清楚。最近的研究表明，STAT家族成員之一STAT3是炎性反應(yīng)的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，巨噬細(xì)胞STAT3基因特異性敲出的小鼠不產(chǎn)生對(duì)移植腫瘤的免疫耐受。我們選擇STAT3作為切入點(diǎn)，從分子水平探討TAMs的STAT3信號(hào)途徑在誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)乳腺癌發(fā)生免疫耐受中的作用和機(jī)制。實(shí)

2、驗(yàn)從三個(gè)方面進(jìn)行研究，主要方法、結(jié)果及結(jié)論如下： 1用免疫組化方法檢測人乳腺癌標(biāo)本中TAMs和STAT3陽性的TAMs的浸潤密度，ILISA檢測乳腺癌標(biāo)本中的細(xì)胞因子IL．12、IL．1B、TNF-II、TGF-p含量，分析TAMs、STAT3陽性的TAMs浸潤密度與腫瘤局部細(xì)胞因子IL-12、IL一1p、TNF-(I、TGF-p水平以及與臨床預(yù)后指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3陽性的TAMs浸潤程度與局部免疫激活性細(xì)胞因子I

3、Ll2水平呈負(fù)相關(guān)，與免疫抑制和促腫瘤性細(xì)胞因子IL一1p、rNF-o[、TGF-p的含量呈正相關(guān)、與乳腺癌的部分不良預(yù)后指標(biāo)呈正相關(guān)，高密度的STAT3陽性的TAMs浸潤是影響無復(fù)發(fā)生存率的然險(xiǎn)因素。 2用EMSA檢測STAT3decoyODNs與STAT3蛋白結(jié)合的特異性，免疫熒光法檢測STAT3decoyODNs的轉(zhuǎn)染率，Westernblot檢測STAT3decoyODNs在細(xì)胞內(nèi)對(duì)STAT3調(diào)控的靶基因表達(dá)的抑制效應(yīng)，

4、證實(shí)STAT3decoyODNs能特異性地與STAT3蛋白結(jié)合并能被高效率地轉(zhuǎn)染入細(xì)胞、在細(xì)胞內(nèi)抑制STAT3的活性。用含有人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的培養(yǎng)上清液的條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞，STAT3decoyODNs轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞并用細(xì)菌的LPS將其激活，檢測單核細(xì)胞STAT3的活性，并檢測單核細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL一12、IL一1p、TNF-0t、TGF—B產(chǎn)量和這些細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接細(xì)胞毒性和抗原呈遞能力；用大鼠乳腺癌細(xì)胞的

5、條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠的腹腔巨噬細(xì)胞，STAT3decoyODNs轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞并用細(xì)菌的LPS將其激活，檢測巨噬細(xì)胞STAT3的活性，并檢測巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL．12、IL一1p、rNF-a、TGF-13產(chǎn)量和這些細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接細(xì)胞毒性和抗原呈遞能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后，伴隨STAT3的過度激活，誘導(dǎo)的單核細(xì)胞分泌的免疫激活性細(xì)胞因子IL。12產(chǎn)量下降、免疫抑制和促腫瘤生長性細(xì)胞因子IL一1p、

6、TGF-p的產(chǎn)量增加，與對(duì)照組比較均有顯著差異；而且單核細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性和抗原呈遞能力減弱，單核細(xì)胞的直接細(xì)胞毒性及呈遞腫瘤抗原刺激的淋巴細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞毒性與對(duì)照組比較均有顯著差異。轉(zhuǎn)染STAT3decoyODNs使誘導(dǎo)的單核細(xì)胞分泌的免疫激活性細(xì)胞因子IL一12產(chǎn)量增加、而免疫抑制和促腫瘤生長性細(xì)胞因子IL．1p、TNF-(I、TGF-p的產(chǎn)量減少，與誘導(dǎo)組比較均有顯著差異；并且能增強(qiáng)誘導(dǎo)的單核細(xì)胞的直接細(xì)胞毒性和抗原呈

7、遞能力，單核細(xì)胞的直接細(xì)胞毒性及呈遞腫瘤抗原刺激的淋巴細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞毒性與誘導(dǎo)組比較均有顯著差異。經(jīng)SD大鼠乳腺癌細(xì)胞SHZ-88條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)后，伴隨STAT3的過度激活，誘導(dǎo)的SD大鼠的巨噬細(xì)胞分泌的IL．12產(chǎn)量下降，IL一1p、TGF—β的產(chǎn)量增加，與對(duì)照組比較均有顯著差異；而且對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性和抗原呈遞能力減弱，巨噬細(xì)胞的直接細(xì)胞毒活性及呈遞腫瘤抗原刺激的淋巴細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞毒性與對(duì)照組比較均有顯著差異。轉(zhuǎn)染ST

8、AT3decoyODNs使誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分泌的IL．12產(chǎn)量增加，IL一1B、TNF-~、TGF-p的產(chǎn)量減少，與誘導(dǎo)組比較均有顯著差異；并且能增強(qiáng)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的直接細(xì)胞毒活性和抗原呈遞能力，巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性及呈遞腫瘤抗原刺激的淋巴細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞毒性與誘導(dǎo)組比較均有顯著差異。 3將SD大鼠的乳腺癌細(xì)胞移植到SD大鼠，然后在腫瘤局部注射乳腺癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞或轉(zhuǎn)染STAT3decoyODNs的誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞，檢

9、測腫瘤的生長、乳腺癌標(biāo)本中的細(xì)胞因子IL一1p、TNF-(I、TGF-p、IL一12含量，腫瘤組織中CD3+的淋巴細(xì)胞的浸潤密度，腫瘤組織的caspase-3的表達(dá)強(qiáng)度，腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)，大鼠脾T細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的毒性和被腫瘤抗原刺激后的IFN-7產(chǎn)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組腫瘤生長速度加快，在第24、28、32天腫瘤體積與對(duì)照組比較有顯著差異；腫瘤組織中的免疫抑制性和促腫瘤作用的細(xì)胞因子IL一1p、TGF-p含量增加，免疫激活

10、性細(xì)胞因子IL一12含量減少，與對(duì)照組比較有顯著差異；腫瘤組織的淋巴細(xì)胞浸潤密度明顯減少，與對(duì)照組比較，有顯著差異；腫瘤細(xì)胞的caspase-3表達(dá)下降，與對(duì)照組比較，有顯著差異；腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)減少，與對(duì)照組比較，有顯著差異；大鼠脾T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性和被腫瘤抗原刺激后的IFN-7產(chǎn)量明顯下降，與對(duì)照組比較，有顯著差異。轉(zhuǎn)染STAT3decoyODNs的誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞處理組明顯抑制腫瘤的生長，在第20、24、28、32天，腫瘤體積與

11、誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組比較有顯著差異；腫瘤組織的免疫抑制性和促腫瘤作用的細(xì)胞因子IL-1p、TNF-~、TGF-β含量減少，免疫激活性細(xì)胞因子ILl2含量增加，與誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組比較有顯著差異；乳腺癌組織中的T淋巴細(xì)胞浸潤密度明顯增加，與誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組比較有顯著差異；乳腺癌細(xì)胞的cacpase-3表達(dá)明顯增強(qiáng)，與誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組比較有顯著差異；腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯增加，與誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞處理組比較有顯著差異；大鼠脾T細(xì)胞對(duì)腫