AMPK激活劑二甲雙胍對裸鼠人食管癌轉(zhuǎn)移瘤VEGF表達(dá)水平的影響觀察與討論.pdf

1、背景及目的：
　　二甲雙胍作為雙胍類口服降糖藥的代表藥物,目前被廣泛應(yīng)用于臨床，能改善2型糖尿病患者糖耐量狀況及胰島素的敏感性。近年來，二甲雙胍因其抗腫瘤作用而受到學(xué)者的廣泛關(guān)注，并有相關(guān)流行病學(xué)報道二甲雙胍的使用與腫瘤的發(fā)病率及腫瘤預(yù)后成一定相關(guān)性。近來研究證實二甲雙胍為腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的激活劑，具有抑制腫瘤細(xì)胞生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期停滯及細(xì)胞凋亡的生物學(xué)效

2、應(yīng)。然而目前有關(guān)二甲雙胍針對食管癌腫瘤血管生成的研究尚未見諸報道。本課題組前期的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)二甲雙胍通過激活A(yù)MPK，下調(diào)cyclin D1，促進(jìn)p53、p21CIP1及p27KIP1表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，抑制裸小鼠食管癌移植瘤生長。本實驗是在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，通過觀察二甲雙胍對裸小鼠食管癌移植瘤的VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）水平的影響，結(jié)合目前相關(guān)科研進(jìn)展，對實驗結(jié)果進(jìn)行討論，為有關(guān)二甲雙胍與腫瘤血管生成相關(guān)性研究提供一定的實驗

3、參考。
　　材料和方法：
　　1.取手術(shù)切除后1小時內(nèi)的新鮮人食管鱗癌組織（標(biāo)本取自汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院，見表3-1），保存在RPMI-1640培養(yǎng)基（不含胎牛血清）中。所有食管癌組織均經(jīng)組織學(xué)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌。
　　2.將人食管鱗癌組織切碎后，按體積1：1與MatrigelTM基質(zhì)膠混合。然后，使用16號注射器針頭將0.1ml混合物接種在8周齡雄性裸小鼠背部皮下，建立裸小鼠人食管鱗癌移植瘤動物模型，并隨機(jī)分

4、配到2個組（處理組、對照組）。接種后第3天開始，每天予以藥物干預(yù)：處理組用二甲雙胍工作液灌胃（250mg/Kg/d）、對照組則使用等體積的溶劑生理鹽水。灌胃期間，每2天測量移植瘤體積變化。全程灌胃結(jié)束后，處死裸小鼠，收集瘤體組織進(jìn)行組織學(xué)鑒定及分子分析。
　　3.將裸小鼠人食管鱗癌移植瘤的最長直徑達(dá)到1.5cm的日期視為裸小鼠死亡的日期，繪制生存曲線，對兩組裸小鼠進(jìn)行生存分析。
　　4. HE染色觀察標(biāo)本組織鏡下大體情況及壞

5、死面積；免疫組織化學(xué)染色觀察經(jīng)二甲雙胍干預(yù)的食管癌移植瘤組織VEGF的表達(dá)及分布情況。
　　5. Western Blot檢測經(jīng)二甲雙胍干預(yù)后食管癌移植瘤組織內(nèi)AMPK磷酸化程度，以及血管內(nèi)皮生長因子VEGF的表達(dá)情況。
　　6.觀察灌胃期間不同時間點裸小鼠的體重、血糖變化。
　　7.實驗數(shù)據(jù)分析和處理：用SPSS17.0軟件，所有數(shù)據(jù)分別使用兩個獨立樣本的t檢驗及進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.使用

6、二甲雙胍進(jìn)行干預(yù)后，裸小鼠人食管鱗癌移植瘤體積顯著減小。
　　2.二甲雙胍顯著延長荷瘤裸小鼠的生存期。
　　3.二甲雙胍干預(yù)的裸小鼠人食管鱗癌移植瘤組織AMPK磷酸化程度顯著增強(qiáng)。
　　4.二甲雙胍干預(yù)的裸小鼠人食管鱗癌移植瘤組織壞死面積組間無差異，對VEGF表達(dá)水平無顯著影響。
　　5.二甲雙胍對裸小鼠體重及血糖水平無顯著影響。
　　結(jié)論：
　　二甲雙胍作為AMPK激活劑能顯著抑制裸小鼠人食管癌移植