二甲雙胍激活A(yù)MPK、調(diào)控細(xì)胞周期抑制裸小鼠人食管鱗癌移植瘤生長.pdf

1、背景及目的：
　　食管癌是常見的惡性腫瘤之一，其病死率在全世界惡性腫瘤中排名第六位，其中約90％為鱗狀細(xì)胞癌。最近有研究表明，常用的雙胍類降血糖藥物二甲雙胍可以降低腫瘤的患病風(fēng)險及改善多種腫瘤的預(yù)后。我們前期的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以在體外誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞株增殖抑制。此外，在體內(nèi)實驗中，二甲雙胍同樣對食管癌移植瘤具有顯著的增殖抑制作用。其抗腫瘤作用的關(guān)鍵機制是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kin

2、ase，AMPK），并誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯。然而，在利用人食管鱗癌組織建立的移植瘤模型中，二甲雙胍是否具有增殖抑制作用，至今尚未見報道。在本研究中，我們探討二甲雙胍對裸小鼠人食管鱗癌移植瘤的作用及其分子機制，為臨床上二甲雙胍成為治療食管鱗癌的新型抗腫瘤藥物提供新的理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法：
　　1.新鮮人食管鱗癌組織從汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院獲取后保存在 RPMI-1640培養(yǎng)基（不含胎牛血清）中。所有食管癌組織均經(jīng)組織學(xué)確

3、診為食管鱗狀細(xì)胞癌。
　　2.將人食管鱗癌組織切碎后，按體積1：1與MatrigelTM基質(zhì)膠混合。然后，使用16號注射器針頭將0.1ml混合物接種在8周齡雄性裸小鼠背部皮下，建立裸小鼠人食管鱗癌移植瘤動物模型，并隨機分配到2個組（處理組、對照組）。接種后第3天開始，每天予以藥物干預(yù)：處理組用二甲雙胍工作液灌胃（250mg/Kg/d）、對照組則使用等體積的溶劑生理鹽水。灌胃期間，每2天測量移植瘤體積變化。全程灌胃結(jié)束后，處死裸小鼠

4、，收集瘤體組織進行組織學(xué)鑒定及分子分析。
　　3.將裸小鼠人食管鱗癌移植瘤的最長直徑達到1.5cm的日期視為裸小鼠死亡的日期，繪制生存曲線，對兩組裸小鼠進行生存分析。
　　4. Western Blot檢測兩組食管癌移植瘤組織內(nèi)AMPK磷酸化程度，以及細(xì)胞周期調(diào)控因子cyclin D1、p21CIP1及p27KIP1的表達情況。
　　5.觀察灌胃期間不同時間點裸小鼠的體重、血糖變化。
　　6.實驗數(shù)據(jù)分析和處理：

5、用SPSS17.0軟件，所有數(shù)據(jù)分別使用兩個獨立樣本的t檢驗及Log-rank檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.二甲雙胍干預(yù)的裸小鼠人食管鱗癌移植瘤體積顯著減小。
　　2.二甲雙胍顯著延長荷瘤裸小鼠的生存期。
　　3.二甲雙胍干預(yù)的裸小鼠人食管鱗癌移植瘤組織AMPK磷酸化程度顯著增強。
　　4.二甲雙胍干預(yù)的裸小鼠人食管鱗癌移植瘤組織cyclin D1表達顯著降低，p21CIP1及p27KIP1表達