二甲雙胍通過AMPK減輕TNF-α誘導(dǎo)的急性肝損傷.pdf

1、目的：腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factorα, TNF-α）在許多感染性疾病的致病機(jī)理中起著重要作用，抑制TNF-α可能有助于感染性疾病的治療。二甲雙胍（metformin，MET）是一種價(jià)格經(jīng)濟(jì)、安全有效的口服降糖藥物，目前MET用于治療2型糖尿病已有近60年的歷史。新近研究發(fā)現(xiàn)：MET除具降糖作用外，還可通過激活腺苷活化蛋白激酶（AMP-activedprotein kinase，AMPK）發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗

2、腫瘤等藥理學(xué)效應(yīng)。本文探討了MET在TNF-α誘導(dǎo)的急性肝損傷的可能保護(hù)作用，并探討了這些效應(yīng)與AMPK之間的可能關(guān)聯(lián)。
　　方法：雄性BALB/c小鼠（20-25 g）腹腔注射TNF-α（20μg/kg）及 D-Gal（700 mg/kg）誘導(dǎo)急性肝損傷。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分：第一部分小鼠隨機(jī)分成4組，每組8只，分別為A）溶劑對(duì)照組（腹腔注入等體積的溶劑）；B）藥物對(duì)照組（腹腔注射MET，劑量為400 mg/kg，溶于生理鹽水）；

3、C）模型組（腹腔注射TNF-α/D-Gal）；D）處理組（注入MET后30 min再注入 TNF-α/D-Gal）。
　　第二部分小鼠隨機(jī)分成3組，每組8只，分別為A）模型組（腹腔注射TNF-α/D-Gal）；B）MET處理組（注入MET后30 min再注入TNF-α/D-Gal）；C） AMPK抑制劑阻斷組（注入MET后15 min腹腔注射AMPK抑制劑Compand C，劑量為15 mg/kg，隨后15 min再注入TNF-α

4、/D-Gal）。各組小鼠在TNF-α/D-Gal注入后6 h，麻醉小鼠摘眼球取血，斷頸處死小鼠采集肝臟，檢測血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ alanine aminotransferase， ALT）及門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ alanine aminotransferase， AST）水平，觀察肝組織病理學(xué)形態(tài)改變，檢測肝組織中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性，檢測肝組織中激活型Caspase-3的蛋白含量，并用羅

5、氏TUNEL試劑盒檢測肝細(xì)胞內(nèi)的凋亡情況。
　　結(jié)果：在第一部分實(shí)驗(yàn)研究中，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明MET可有效減輕TNF-α/D-Gal誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠模型，主要表現(xiàn)在MET處理可顯著降低血清中ALT、AST水平，MET處理顯著減輕肝組織病理學(xué)形態(tài)損傷，并且抑制肝組織中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性，MET下調(diào)激活型Caspase-3的蛋白水平，同時(shí)MET抑制TNF-α/D-Gal誘導(dǎo)的陽性肝細(xì)胞的數(shù)目

6、，這些結(jié)果說明MET可顯著減輕肝細(xì)胞凋亡及肝組織損傷。
　　在第二部分研究中，本實(shí)驗(yàn)使用了AMPK抑制劑Compand C探索MET和AMPK之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Compand C可解除MET對(duì)TNF-α/D-Gal誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡和肝組織損傷的保護(hù)作用，取消MET對(duì)Caspase活性的抑制效應(yīng)及MET對(duì)激活型Caspase-3蛋白水平的下調(diào)作用，但血漿中轉(zhuǎn)氨酶ALT的升高降低了部分恢復(fù)，這些結(jié)果說明AMPK抑制劑Compand