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1、目的:構(gòu)建Pg prtC和pgmA基因原核表達(dá)系統(tǒng)并鑒定表達(dá)產(chǎn)物的免疫反應(yīng)性和抗原性,了解慢性牙周炎患者牙周組織破壞程度與齦下菌斑標(biāo)本中PrtC水平之間的關(guān)系.討論與結(jié)論: 1.我們克隆的Pg prtC、pgmA基因核苷酸和氨基酸序列與GeneBank中相應(yīng)序列的相似性高達(dá)98%以上,所構(gòu)建的pET32a-prtC-E.coliBL21DE3、pET32a-pgmA-E.coliBL21DE3在IPTG劑量低至0.05 mmol/L時也
2、能很好地表達(dá)rPrtC和rPgmA,其表達(dá)量高達(dá)細(xì)菌總蛋白的50%左右,表明該研究成功地構(gòu)建了Pg prtC和pgmA基因高效原核表達(dá)系統(tǒng).2.Western blot結(jié)果證實,rPrtC、rPgmA可誘導(dǎo)家兔產(chǎn)生特異性抗體,也可被兔抗Pg全菌抗體所識別,表明rPrtC和rPgmA是有良好的抗原性和免疫反應(yīng)性的細(xì)菌表面蛋白,可作為制備Pg免疫檢測試劑盒及疫苗的候選抗原.3.ELISA結(jié)果證實,重度慢性牙周炎齦下菌斑中的PrtC水平明顯高
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