帕金森病(PD)致病基因LRRK2啟動(dòng)子分離及PD相關(guān)基因CSP-α、Nrdp1、USP24突變篩查研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文帕金森病（PD）致病基因LRRK2啟動(dòng)子分離及PD相關(guān)基因CSPα、Nrdp1、USP24突變篩查研究姓名：莫曉云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：夏昆20100501博士學(xué)位論文中文摘要胞和Hela細(xì)胞中進(jìn)行各缺失片段的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及熒光素酶活性分析，確定啟動(dòng)子所在區(qū)域。并運(yùn)用Matlnspector對(duì)LRRK2基因核心啟動(dòng)子可能的順式元件進(jìn)行生物信息學(xué)分析，為將來(lái)順式元件的鑒定及轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究奠定基礎(chǔ)。結(jié)果：

2、本研究對(duì)LRRK2基因在腦組織中表達(dá)的最主要剪切本ENST00000298910進(jìn)行分析，以LRRK2基因的RefSeq序列NM198578的蛋白翻譯起始位點(diǎn)“ATG“的A堿基為l位進(jìn)行描述。結(jié)果顯示530／143間的387bp在2個(gè)細(xì)胞株中具有最強(qiáng)的啟動(dòng)活性；將片段一530／143自5’向3’方向截短后，啟動(dòng)活性在兩個(gè)細(xì)胞株中均明顯下降，但最短的缺失片段(232／143)在2個(gè)細(xì)胞株中的啟動(dòng)活性仍顯著高于pGL3Basic的基礎(chǔ)值(薩

3、005)，因此232／143間的89bp很可能存在LRRK2基因的基礎(chǔ)啟動(dòng)子，其在神經(jīng)細(xì)胞及非神經(jīng)性細(xì)胞中均能啟動(dòng)報(bào)告基因的表達(dá)。將片段530／143自5，向3’方向缺失104bp后，啟動(dòng)活性在兩個(gè)細(xì)胞株中均明顯減弱(薩O05)，因此推測(cè)在530至426區(qū)間可能存在具有正性調(diào)控啟動(dòng)活性的順式作用元件；將片段一659／1自3’向5’方向截短142bp得到片段659／143，其啟動(dòng)活性明顯增強(qiáng)(正O05)，而片段659／143自5’向3’方

4、向截短129bp得到片段530／143，其啟動(dòng)活性也增強(qiáng)(胙O05)，因此推測(cè)143至1區(qū)間、659至530區(qū)間可能存在負(fù)性調(diào)控啟動(dòng)活性的順式作用元件。將片段一426／143自5響3’方向截短94bp得到片段332／143，其啟動(dòng)活性在Hela細(xì)胞減弱(FO05)，而在SH—SY5Y細(xì)胞中無(wú)明顯變化(礦O05)；將片段332／143自5’向37方向截短lOObp得到的片段232／143，其啟動(dòng)活性在Hela細(xì)胞中增強(qiáng)(廬005)，而在S