肌張力障礙致病基因的突變篩查.pdf

1、肌張力障礙(dystonia)是一組以持續(xù)性的肌肉收縮、重復(fù)性扭轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)和異常姿勢(shì)為特征的神經(jīng)性肌肉運(yùn)動(dòng)障礙。它分為兩種類型。繼發(fā)性肌張力障礙，可以由腦部腫瘤、感染或者外界環(huán)境的特殊刺激等造成。遺傳缺陷在某些病人中被認(rèn)為是導(dǎo)致原發(fā)性肌張力障礙的原因。通常認(rèn)為，患者的大腦發(fā)生了功能上或者微結(jié)構(gòu)的變化。 該疾病的臨床表現(xiàn)具有一定的異質(zhì)性。基因基礎(chǔ)也有一定的遺傳異質(zhì)性(genetic heterogeneity)。至今，遺傳性肌張力障礙

2、，已克隆基因有7個(gè)，還有6個(gè)已定位的染色體節(jié)段，但基因尚未被克隆。這7個(gè)基因編碼的蛋白產(chǎn)物均以不同機(jī)制影響該疾病的發(fā)病過(guò)程。TOR1A基因(GenBank ID：NM_000113)，編碼產(chǎn)物為扭轉(zhuǎn)蛋白A，此基因突變會(huì)造成早發(fā)性扭轉(zhuǎn)型肌張力障礙(DYTI)的運(yùn)動(dòng)性疾病；TAFI(TATA-結(jié)合蛋白相關(guān)因子1，GenBankID：NM_004606)基因，編碼最大的轉(zhuǎn)錄因子Ⅱ D(TF Ⅱ D)復(fù)合物組件，該基因的異常改變可以導(dǎo)致X-連鎖

3、隱性遺傳的肌張力障礙-帕金森病(XDP，DYT3)；GCH1基因，編碼GTP環(huán)水解酶I，此基因突變會(huì)導(dǎo)致罕見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病稱多巴反應(yīng)性肌張力障礙(DYT5)；MR-1基因(GenBank ID：NM_015488.4)，編碼肌纖維生成調(diào)節(jié)因子1，突變會(huì)導(dǎo)致陣發(fā)性非運(yùn)動(dòng)源性運(yùn)動(dòng)障礙(PNKD，DYT8)；SGCE基因(GenBank ID：NM_003919)，編碼產(chǎn)物為ε肌膠質(zhì)，致病突變會(huì)引起遺傳性肌陣攣．肌張力障礙(MD，DYT11)

4、；DRD2(多巴胺D2受體，GenBank ID：NM_000795)基因的突變也可以導(dǎo)致MD。ATP1A3基因(GenBank ID：NM_152296)，為Na+／K+-ATP酶α 3亞基編碼，它的錯(cuò)義突變會(huì)引起早發(fā)型肌張力障礙-帕金森病(RDP，DYT12)。本實(shí)驗(yàn)的目的旨在所收集的患者中研究上述基因的突變譜。本次實(shí)驗(yàn)收集了4個(gè)小家庭和6個(gè)散發(fā)病例，疾病經(jīng)由臨床神經(jīng)科教授診斷，患者共16人。診斷標(biāo)準(zhǔn)主要是根據(jù)患者特有的頸部、軀干、

5、四肢的不自主痙攣和扭動(dòng)，而無(wú)明確病因，如再有陽(yáng)性家族史則可確診。病人知情同意后，采集病人和家庭中部分正常人外周靜脈血，基因組DNA提??；設(shè)計(jì)引物，覆蓋了基因的全部編碼區(qū)和外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出上述區(qū)域；將PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定，在ABI 3730XL毛細(xì)電泳測(cè)序儀上讀出序列；利用CLUSTALX軟件將得到的序列與數(shù)據(jù)庫(kù)比較，同時(shí)將病人與家系中的非患者序列也進(jìn)行比較。 經(jīng)過(guò)序列分析后，本實(shí)驗(yàn)在TORIA基因的編

6、碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs，其中1個(gè)SNP是錯(cuò)義突變(rsl801968)，1個(gè)SNP是同義突變(rs2296793)。還有非編碼區(qū)的5個(gè)SNPs和2個(gè)單堿基G缺失，其中2個(gè)SNPs是新發(fā)現(xiàn)的(g．131617436G>A，g．131620813C>G)；由于該錯(cuò)義突變也在非患者中鑒定到，所以該點(diǎn)的致病作用還不能確定。在GCHI基因3’非翻譯區(qū)共發(fā)現(xiàn)3個(gè)SNPs(g．54440930T>C，g．54440981C>T，rs841)，其中有2

7、個(gè)SNPs是新發(fā)現(xiàn)的。ATPlA3基因的編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)1個(gè)新SNP(c．222C>T)，為同義突變；1個(gè)已知SNP(rs61173666)，也為同義突變；在非編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)2個(gè)新的SNPs(g．47168229C>A，g．47168932A>G)。SGCE基因的非編碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs(rs2272091，g．94104852T>G)，和一個(gè)純合性改變(rs61604798)，分別位于第3和第5內(nèi)含子中。DRD2基因中有個(gè)3個(gè)編碼區(qū)SNPs，