14-3-3σ增強胰腺癌細胞株PANC-1細胞增殖和侵襲能力.pdf

1、目的：采用RT-qPCR和western blot檢測不同分化程度胰腺癌細胞株中14-3-3σ的表達，分析14-3-3σ與不同分化程度胰腺癌細胞株的表達相關性。探討14-3-3σ對胰腺癌細胞株PANC-1的細胞增殖和侵襲等生物學效應。
　　方法：提取胰腺癌細胞株BxPC3、CAPAN-1、PANC-1、AsPC-1、SW1990、MiaPaCa-2、CFPAC-1的總RNA和總蛋白，將總RNA和總蛋白定量后采用RT-qPCR和we

2、sternblot在mRNA水平和蛋白水平檢測七株胰腺癌細胞株中14-3-3σ的表達情況。構(gòu)建針對人源性14-3-3σ全長編碼區(qū)cDNA的真核表達載體pEGFP-14-3-3σ，用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染入胰腺癌細胞株PANC-1中。以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與轉(zhuǎn)染空載體pEGFP-N1組胰腺癌細胞株 PANC-1作對照。利用 RT-qPCR和Western blot分別檢測胰腺癌細胞株PANC-1中14-3-3σmRNA及蛋白表達水平；應用MTS法和tr

3、answell法檢測細胞增殖和侵襲能力。
　　結(jié)果：利用RT-qPCR法和westernblot法成功檢測了七種不同分化程度的胰腺癌細胞株中14-3-3σ的表達水平，14-3-3σmRNA的表達水平和14-3-3σ蛋白水平均在BxPC3,SW1990和AsPC-1呈高度表達，在MiaPaCa-2和PANC-1中呈現(xiàn)低度表達，在CFPAC-1和CAPAN-1中表達量介于上述兩者之間。構(gòu)建pEGFP-14-3-3σ，將其轉(zhuǎn)染 PANC

4、-1細胞48小時后14-3-3σmRNA及蛋白表達水平顯著高于轉(zhuǎn)染空載體pEGFP-N1組和空白對照組（p值＜0.05）。MTS法觀察到實驗組細胞增殖能力較對照組呈現(xiàn)增快現(xiàn)象（p值＜0.05），transwell法檢測到實驗組細胞侵襲能力較對照組增強（p值＜0.05）。
　　結(jié)論：14-3-3σ與不同分化程度胰腺癌細胞株的表達相關性有助于解析其在胰腺癌細胞生長、侵襲轉(zhuǎn)移中的分子機制。利用 pEGFP-14-3-3σ轉(zhuǎn)染胰腺癌細胞