雞固有免疫相關分子熒光定量PCR檢測方法的建立及應用.pdf

1、固有免疫應答(innate immune response)是雞體抵抗病毒感染的第一道防線，雞體通過免疫細胞攜帶的模式識別受體來識別病毒感染，激活固有免疫相關的細胞信號通路的傳導，誘導多種細胞因子及炎癥因子的產(chǎn)生，最終導致抗病毒物質的分泌，從而發(fā)揮雞體的抗病毒作用。固有免疫能夠在宿主接觸有害刺激后的幾分鐘至數(shù)小時內執(zhí)行防御功能，不需要特異性免疫細胞和抗體參與，在病毒感染初期保護機體免受病毒侵害。
　　為建立檢測雞固有免疫信號通路相

2、關分子的熒光定量PCR方法并評價其應用效果，本研究設計和篩選了12個基因（MDA5、TLR3、TLR7、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6、IFIT5、PKR和OAS）的特異性PCR引物，制備各基因的質粒標準品，繪制熒光定量 PCR的標準曲線，并對方法的靈敏度、重復性和特異性進行檢驗。結果表明所建立的檢測方法敏感度高、特異性強、檢測線性范圍廣、重復性好。
　　新城疫病毒（Newcastle dise

3、ase virus，NDV）是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一，能給養(yǎng)禽業(yè)帶來非常嚴重的經(jīng)濟損失。為更好地了解NDV的致病機制，我們分別以不同劑量的基因VII型NDV強毒株和LaSota弱毒株感染SPF雞胚，使用建立的熒光定量PCR方法檢測和分析感染初期病毒增殖和雞固有免疫信號通路相關分子基因轉錄水平的動態(tài)變化。結果表明，NDV強、弱毒株均可有效地激活雞固有免疫信號通路，導致包括細胞模式識別受體、干擾素、白細胞介素和抗病毒蛋白等基因轉錄水平