CYP表氧化酶2J2通過抑制心肌細胞炎癥反應向巨噬細胞傳遞防治心肌纖維化.pdf

1、研究背景與目的：
　　心肌纖維化（Myocardial Fibrosis; MF）是心室重塑的重要病理生理變化，可引起心臟舒縮功能障礙，最終導致心力衰竭。近年來，隨著心肌纖維化機制研究的不斷深入，使得炎癥反應在其發(fā)生和進展過程中的作用和地位日益受到重視。
　　花生四烯酸細胞色素P450表氧化酶2J2（CYP2J2）及其代謝產物環(huán)氧二十碳三烯酸（EETs）在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要的保護作用。越來越多的研究表明，CYP2J2-EE

2、Ts系統(tǒng)可抑制心肌纖維化，但其機制尚不明確。本研究通過采用心肌纖維化的動物模型及相關的細胞學實驗探索 CYP2J2-EETs抑制心肌纖維化的作用及機制。
　　實驗方法與結果：
　　首先，我們使用心肌特異性CYP2J2轉基因小鼠（Tr，帶有α-MHC啟動子）與野生型C57BL/6小鼠（WT），采用異丙腎上腺素（isoproterenol; Iso）和人血管緊張素II(human angiotensin II;Ang II)皮下

3、微泵植入方法建立了兩種心力衰竭模型。通過心臟超聲、血流動力學及組織學檢測，我們發(fā)現(xiàn)Tr可明顯地改善Ang II或Iso誘導的心功能受損；通過心臟石蠟切片天狼猩紅染色、Western blotting及real-time PCR分別在大體及蛋白和核酸水平檢測I型和III型膠原的表達，實驗結果顯示，Tr可逆轉Ang II或Iso誘導的膠原沉積；為進一步證實CYP2J2是否是通過減弱炎癥反應而抑制心肌纖維化（MF）進展的，我們檢測了實驗動物心

4、臟組織中炎癥細胞浸潤程度及炎癥通路相關蛋白的表達情況。結果發(fā)現(xiàn)，Ang II和Iso均可導致心肌組織內巨噬細胞大量浸潤以及NF-κB入核增多，而心肌細胞特異性高表達 CYP2J2可明顯地抑制巨噬細胞聚積以及 NF-κB入核。在體實驗結果表明，心肌細胞內高表達 CYP2J2可顯著抑制心肌纖維化（MF）發(fā)生和進展。
　　隨后，我們在體外實驗探索了心肌細胞在MF發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制。（1）首先，在體外培養(yǎng)的原代心肌細胞或心肌細胞系（

5、H9c2）中，用Ang II或Iso刺激后，NF-κB的入核及活性明顯增加；在體外培養(yǎng)的原代巨噬細胞或巨噬細胞系（RAW264.7）中，加入心肌細胞來源的條件培養(yǎng)基，我們發(fā)現(xiàn)在巨噬細胞中發(fā)生了炎癥反應，且此炎癥反應由心肌細胞傳遞而來并受心肌細胞調控；用培養(yǎng)了巨噬細胞的培養(yǎng)基去刺激原代成纖維細胞或纖維細胞系（NIH/3T3），我們驚喜地發(fā)現(xiàn)，成纖維細胞膠原合成增加；（2）然而，在心肌細胞中，預先外源性加入EETs（CYP2J2代謝產物），

6、可抑制Iso或Ang II引起的NF-κB的入核及活性；再用此條件培養(yǎng)基干預巨噬細胞，巨噬細胞活化受到明顯抑制，主要表現(xiàn)為炎癥通路NF-κB的核轉移減少且與DNA結合能力下降；巨噬細胞來源的條件培養(yǎng)基繼續(xù)干預成纖維細胞，結果顯示，成纖維細胞的活化及其膠原合成明顯減少。
　　結論：
　　綜上所述，利用轉基因技術，高表達CYP2J2-EETs系統(tǒng)可顯著抑制心肌纖維化進展，其作用機制可能部分是通過調節(jié)心肌細胞-巨噬細胞-成纖維細胞