表達豬瘟病毒E2-E0蛋白的犬2型腺病毒活載體重組疫苗株的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬瘟是豬的一種高度接觸性傳染病,死亡率很高。給養(yǎng)豬業(yè)生產造成重大的經濟損失。目前在我國廣泛使用的預防豬瘟的疫苗為豬瘟兔化弱毒疫苗株(國外稱為C株),具有免疫力強,保護率高且持久,遺傳穩(wěn)定、無殘余毒力等優(yōu)點,是國際上公認的效果最好的豬瘟弱毒疫苗,該弱毒疫苗的使用為防制豬瘟起到了十分重要的作用,但是弱毒疫苗免疫的最大缺點是難以用血清學方法與自然感染區(qū)分開,不利于豬瘟的凈化及消滅。面對十多年來豬瘟病毒在大規(guī)模免疫接種壓力下出現(xiàn)的各種復雜情況,

2、探索研制豬瘟病毒的安全高效而又實用的新型疫苗,為我國控制及最終消滅豬瘟找到一種切實可行的方法和手段,具有重要的現(xiàn)實意義。 本實驗室在前期工作中,構建了以犬2型腺病毒(CAV-2)弱毒為載體的表達O型口蹄疫病毒VPl蛋白的重組CAV-2-VP1疫苗,免疫試驗結果表明,該重組疫苗可誘發(fā)機體針對口蹄疫病毒和CAV-2的免疫應答,提示我們以CAV-2為載體構建重組疫苗用于豬的免疫是可行的。本研究選擇豬瘟病毒兔化弱毒株E0,E2糖蛋白作為

3、保護性抗原,分別構建重組CAV-2病毒。同時對重組病毒進行豬免疫試驗,檢測重組病毒免疫原性,制備豬瘟重組活載體疫苗候選株,為豬瘟重組活載體疫苗研究奠定基礎。 研究首先在前期獲得的CAV-2感染性全基因組質粒pPolyⅡ-CAV-2的基礎上,對其E3區(qū)進行缺失,分別捅入豬瘟病毒兔化弱毒株糖蛋白E0,E2基因的表達盒,轉染犬腎細胞系,成功獲得兩株重組病毒CAV-2-CSFV-E0、CAV-2-CSFV-E2。 對這兩株重組病

4、毒進行了生物學特性的研究,通過電鏡觀察、細胞半數(shù)感染量(TCID<,50>)測定、血凝和血凝抑制試驗,檢測病毒的形態(tài)、反應原性、生長特性。通過PCR、RT-PCR、Westem-blot方法對重組病毒的遺傳穩(wěn)定性和糖蛋白基因的轉錄和表達量進行了檢測。研究結果顯示,各株重組病毒具有典型的腺病毒形態(tài)結構;相同TCID<,50>的重組病毒和母源病毒都能凝集人的紅細胞,血凝效價沒有差別;相同TCID<,50>重組病毒和母源病毒接種DK細胞,病毒

5、增殖特性與母源病毒沒有差異;重組病毒在體外連續(xù)傳30代,性質穩(wěn)定,沒有出現(xiàn)外源基因的缺失和重排;重組病毒感染細胞后能夠穩(wěn)定轉錄和表達豬瘟病毒糖蛋白,具有良好的反應原性。 應用這兩株重組病毒對一月齡斷乳仔豬進行免疫實驗,通過口服免疫途徑免疫。試驗中受試豬共24頭,分為5組,前3組每組6頭,前兩組分別口服免疫重組毒CAV-2-CSFV-E0、CAV-2-CSFV-E2,第3組為CAV-2-CSFV-E0和CAV-2-CSFV-E2聯(lián)

6、合免疫,第4組為CAV-2對照組,第5組為豬瘟兔化弱毒活疫苗對照組,對照組分別設3頭豬。免疫時每頭豬口服2mL(10<'8>TCID<,50>/0.1 mL)病毒,免疫前及免疫后定期采血,連續(xù)12周。經Western-blot分析抗體組成;HI檢測腺病毒抗體血凝抑制效價;熒光抗體試驗和ELISA測定抗體中和效價。結果顯示,兩株重組毒在豬體內同時誘導產生了針對豬瘟病毒和腺病毒的兩種特異性抗體。HI試驗表明,各株重組毒與CAV-2病毒血凝效

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