A組輪狀病毒NSP1基因的克隆表達(dá)及免疫學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、輪狀病毒（rotavirus，RV）屬于呼腸病毒科（Reoviridae）輪狀病毒屬（Rotavirus），是一個(gè)直徑約為70nm，無(wú)包膜，具有三層衣殼蛋白組成的正二十面體雙鏈RNA病毒。RV是引起哺乳類(lèi)和鳥(niǎo)類(lèi)及人類(lèi)腹瀉的主要病原體，每年全球因Rv感染所導(dǎo)致的重癥腹瀉而死亡的兒童約600000。RV基因組包含11個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA，編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（VP1-VP4，VP6，VP7）和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1-NSP6）。根據(jù)結(jié)構(gòu)蛋白V

2、P6的抗原性差異，可將已發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒分為A-G7個(gè)組，其中，A組為引起嬰幼兒腹瀉的主要病原。
　　 RV NSP1在病毒與宿主的相互作用中發(fā)揮著重要的功能。本研究運(yùn)用基因克隆和重組表達(dá)技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)了RV TB-Chen株NSP1蛋白，進(jìn)行了NSP1的免疫學(xué)性質(zhì)和RV感染細(xì)胞中NSP1蛋白的合成與分布以及NSP1的系統(tǒng)進(jìn)化和基因分型研究。結(jié)果表明，大腸桿菌BL21（DE3）能高效表達(dá)重組NSP1蛋白（rNSP1），rNS

3、P1表達(dá)量約占菌體總蛋白的34.4％。rNSP1能誘導(dǎo)免疫豚鼠產(chǎn)生特異性血清抗體。Western blot及免疫熒光檢測(cè)結(jié)果表明，抗rNSP1血清抗體能特異性識(shí)別自身蛋白，對(duì)SA11，Wa株的NSP1蛋白有交叉反應(yīng)性：免疫熒光結(jié)果還表明，SA11感染的MA104細(xì)胞中合成的NSP1蛋白在細(xì)胞質(zhì)中區(qū)域化聚集形成輻射狀排列的顆粒狀結(jié)構(gòu)，而Wa株的NSP1不能形成此樣結(jié)構(gòu)。分子系統(tǒng)進(jìn)化研究結(jié)果表明，至今發(fā)現(xiàn)的A組RV至少可以分為16個(gè)不同的N