2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、水稻齒葉矮縮病毒(RRSV)是呼腸孤病毒科(Reoviridae)水稻病毒屬(Oryzavirus)的典型成員,。RRSV基因組包括10條雙鏈RNA片段(S1-S10),本文報道了福建農(nóng)林大學植物病毒研究所分離純化并經(jīng)室內(nèi)保存20多年的RRSV福建沙縣分離株(RRSV-F)的基因組S8和S10片段的編碼區(qū)克隆、原核表達、Pns10融合蛋白抗血清的制備和P8蛋白的系統(tǒng)進化分析結(jié)果?! ⊥ㄟ^有機試劑抽提,CF-11纖維素柱層析,從感病水稻

2、葉片中獲取該病毒的全基因組,根據(jù)RRSV泰國分離株(RRSV-T)S10開放閱讀框(ORF)核苷酸序列(nt142-1035)和S8開放閱讀框核苷酸序列(nt23-1810)分別設計引物,通過RT-PCR方法擴增出特異性目的條帶。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)回收、連接、轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌克隆至pMD18-T載體上,經(jīng)藍白斑和氨芐青霉素抗性篩選和雙酶切和PCR法鑒定,分別獲得了重組質(zhì)粒pMD18-TS10和pMD18-TS8,并進行了序列測定和分析

3、?! ”疚睦肈irectionalTOPO克隆技術(shù)將平整末端單向克隆的S10和S8基因分別轉(zhuǎn)入pET100/D-TOPO載體,構(gòu)建了原核表達載體,并在BL21star(DE3)E.coli中得到了高效表達,分別獲得了約35kD的Pns10融合蛋白和70kD的P8融合蛋白。將獲得的Pns10融合蛋白免疫大耳白兔制備了抗血清,間接ELISA法測定抗血清效價為1:7680,效價高,Westernblot鑒定表明抗血清特異性強。表達產(chǎn)物及多

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