熒光原位雜交在9、17號染色體診斷膀胱癌中的應用研究.pdf

1、目的：比較熒光原位雜交技術（FISH）和尿脫落細胞學檢查在膀胱移行上皮癌診斷中的敏感性和特異性，評價：FISH技術在膀胱癌診斷中的應用價值。
　　 方法：以河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院泌尿外科2008年4月至2008年12月共收治100例疑似膀胱移行上皮癌的血尿患者為研究對象，包括24例有膀胱移行細胞癌病史者和76例無膀胱癌病史者。正常對照20例。熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，簡稱F

2、ISH）是一種應用非放射性熒光物質依靠核酸探針雜交原理在染色體上顯示DNA序列位置的方法，具有快速、無創(chuàng)性、敏感性高等優(yōu)點，在中期和間期細胞均可檢測DNA序列及其變化。這項技術廣泛應用于腫瘤生物學、細胞遺傳學、基因定位、基因擴增等領域。熒光原位雜交可以檢測到不同類型的細胞遺傳學改變，包括染色體的復制、擴增、缺失等。本研究中所用的FISH探針包括一種組合：GLP P16探針/CSP17探針，P16探針名稱為細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子2

3、A；CSP17探針名稱為17號染色體著絲粒。P16探針雜交到人類9號染色體長臂（9q21），覆蓋整個p16基因，熒光信號為紅色；對照探針為CSP17，探針雜交信號位于人類17號染色體著絲粒（17p11.1-q11.1），覆蓋整個著絲粒區(qū)域，熒光信號為綠色。收集這100例疑似膀胱癌的血尿患者及20例不同年齡的正常人的120份尿液標本，使用熒光標記的17號染色體著絲粒及9q21區(qū)帶探針檢測尿液脫落上皮細胞的染色體異常。通過對20例不同年齡的

4、正常人的尿液進行FISH檢測，并對9q21、17號染色體分別計數(shù)100個細胞，統(tǒng)計出不同類型異常情況細胞數(shù)目，并依此確立閾值。同時，對100例疑似膀胱癌的血尿患者行FISH檢測，采用上述方法對不同類型異常情況細胞計數(shù)，分別與閾值做對比來確定染色體的異常。FISH檢測陽性的標準是9q21、17號染色體均異常或一種染色體同時存在缺失或增多。同時，對100例疑似膀胱癌的血尿患者的尿液行脫落細胞學檢查，細胞學檢查標本與用于FISH檢測的標本同一

5、天取，連續(xù)送3次。結果分為陽性、陰性、可疑。細胞學檢查結果可疑但難以診斷為膀胱癌者，在計算敏感性時按陽性處理。按膀胱癌的分期不同分別計數(shù)FISH及細胞學的陽性例數(shù)，并用統(tǒng)計學方法比較兩者對不同分期腫瘤的敏感性及總特異性。尿液標本需要在膀胱鏡檢查前取，可疑病例要取活檢或切除，組織病理學診斷對腫瘤進行分期。
　　 結果：共有93例患者被病理學診斷為膀胱或上尿路移行細胞癌。FISH對不同分期膀胱癌pTis/pTa（22例），pT1（5

6、2例），pT2（14例）和：pT3/pT4（5例）診斷的敏感性分別為54.55％，88.46％，92.86％和100％。脫落細胞學對不同分期膀胱癌pTis/pTa（22例），pT1（52例），pT2（14例）和pT3/pT4（5例）診斷的敏感性分別為22.72％，38.46％，78.57％和100％。對于pTis/pTa期膀胱癌（P=0.030），pT1期膀胱癌（P=0.001），pT2期膀胱癌（P=0.596），pT3/pT4期膀胱癌

7、（P>0.05）。FISH總體的敏感性為81.72％，細胞學的總體敏感性為44.09％（P=0.001），而FISH和細胞學的特異性分別為85.71％和100％（P=0.299）。
　　 結論：FISH用于檢測膀胱移行上皮癌的血尿患者敏感性明顯高于尿脫落細胞學檢查，特異性無顯著差異。FISH技術能明顯改進膀胱癌的診斷，對于膀胱癌的篩查有重要意義。此研究為中國人群膀胱癌非創(chuàng)傷性、高特異性、高敏感性的早期診斷方法的建立提供理論依據(jù)。