15198.znf580在tgfβ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)enos中的作用研究

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。，，∥：Z一薯。j一。／0。、!i‘!‘1研究生簽名：起捷導(dǎo)師簽章：歹移艾

2、玟害篆霉磊茹喜≥毒文j’bf輝。名月螃日、’、j，’吃：’i。“。、：7河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽As名：走瑛中文摘要ZNF580在TGF—p誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eNOS中的作用研究摘要ZNF580是由本課題組克隆的一種新的人C2H2型鋅指蛋白基因

3、，與Kmppel樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子(KNppel1ikefactors，Klfs)家族成員類似，具有參與血管的形成和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。而eNOS(內(nèi)皮型一氧化氮合酶)是維持內(nèi)皮細(xì)胞正常功能所必需的，對(duì)于血管的舒張具有很重要的意義。本實(shí)驗(yàn)旨在探討ZNF580在TGFp誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eNOS中的作用機(jī)制。目的：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(EAhy926)為體外模型，在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGFB的作用下，研究人C2H2型鋅脂蛋白新基因ZNF580表達(dá)

4、情況，分析ZNF580基因表達(dá)與內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)態(tài)相關(guān)因子eNOS之間的關(guān)系，以及ZNF580基因過表達(dá)和低表達(dá)對(duì)eNOS表達(dá)的影響，進(jìn)一步揭示ZNF580在TGFD誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eNOS以及維持內(nèi)皮細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中的作用。方法：①人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(EAhy926)，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，在37。C、5％C02、飽和濕度下培養(yǎng)至EAhy926細(xì)胞生長(zhǎng)成單層后備用。②利用LentiGFPZNF580和LentiRNAiZNF58

5、0瞬時(shí)轉(zhuǎn)染EAhy926內(nèi)皮細(xì)胞，獲得瞬時(shí)過表達(dá)和低表達(dá)ZNF580的EAhy926細(xì)胞。運(yùn)用倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，定量PCR以及westemblot鑒定轉(zhuǎn)染后ZNF580和eNOS的表達(dá)情況。pGL3一control，pGL3eNOSLuc和p—gal質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染EAhy926細(xì)胞，單熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)檢測(cè)eNOS和ZNF580的變化趨勢(shì)是否一致。③胰酶消化收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期EAhy926細(xì)胞，將其懸浮于高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液中，濃度約