水稻黑條矮縮病毒基因組片段S2的分子特性與S6的功能分析.pdf

1、獲得了水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)湖北玉米分離物(Hbm)基因組片段2(S2)的全長cDNA克隆并測定了它的全序列.RBSDV-Hbm S2全長3813個堿基對,具有末端保守序列(+)5-AAGUUUU-AGCNNNNGUC-3,緊鄰其末端保守序列,有一片段特異性的8個堿基的反向重復(fù)序列.S2編碼鏈只含一個開放閱讀框(open reading frame,ORF),編碼一個

2、由1226個氨基酸組成的蛋白,推測其分子量約為141.3kDa.序列同源性比較發(fā)現(xiàn),RBSDV-Hbm S2與RBSDV浙江水稻分離物(Zjr)S2、Mal de Rio Cuarto virus(MRCV)S3、Fiji disease virus(FDV)S3和Nilaparvarta lugens reovirus(NLRV)S3編碼蛋白的氨基酸序列同源性分別為99.7、84.4、58.0和23.2％.進(jìn)化樹分析表明RBSDV-H

3、bm與RBSDV-Zjr的關(guān)系最近,而與MRCV的關(guān)系近于與FDV和NLRV的關(guān)系.另外,構(gòu)建了S2 ORF 5端部分的原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中得到了表達(dá).經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在大腸桿菌中表達(dá)了RBSDV-S6編碼的蛋白(P6),制備了相應(yīng)的抗血清.Western blot分析結(jié)果顯示,用P6的抗血清可在RBSDV侵染的玉米葉片和帶毒的灰飛虱中檢測到P6存在,而與純化的RBSDV粒子蛋白不發(fā)生反應(yīng).此結(jié)果表明,RBSDV-Hbm S6編碼