奶牛乳腺上皮細胞系的建立及生理功能鑒定.pdf

1、本試驗采用組織塊法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞，采用多種方法純化細胞，且對純化的上皮細胞形態(tài)學和生理功能進行鑒定，并以十六代細胞為材料，應用實時定量PCR檢測奶牛乳腺上皮細胞在脂多糖刺激下，細胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達，并研究了催乳激素和賴氨酸處理時乳蛋白合成和分泌功能，結(jié)果說明本試驗培養(yǎng)的細胞具有正常的乳腺上皮細胞功能，為進一步研究建立具有正常功能的永生化奶牛乳腺上皮細胞系奠定基礎(chǔ)。
　　 試驗一用組織塊培

2、養(yǎng)法獲得大量奶牛的原代乳腺上皮細胞，聯(lián)合運用刮除法、相差消化和相差貼壁法、單克隆法可獲得純化的、活力旺盛的乳腺上皮細胞，且在體外可連續(xù)傳代二十五代以上，但隨著細胞超過二十五代以后增殖活力有所下降。應用熒光免疫組化、核型分析和β-酪蛋白表達檢測了體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞的形態(tài)特征和乳蛋白表達，同時檢測到細胞角蛋白18的表達，并鑒定為上皮細胞；此外，研究還發(fā)現(xiàn)在不添加催乳激素的情況下，檢測到乳腺上皮細胞能夠表達較低的β-酪蛋白，實現(xiàn)了奶牛

3、乳腺上皮細胞系的建立。
　　 試驗二初步篩選出脂多糖刺激奶牛乳腺上皮細胞的適宜濃度，再以該濃度刺激細胞，通過RT-PCR法檢測細胞因子IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表達，試驗結(jié)果表明：脂多糖刺激奶牛乳腺上皮細胞24h后，IL-6、IL-8表達量顯著升高(P<0.05)；TNF-α在脂多糖刺激后4h表達量達最高(P<0.05)。研究表明，該細胞可作為研究奶牛乳房炎病理機制以及細胞免疫作用的模型。
　　 試驗三催乳