豬瘟病毒E0-E2基因重組雞痘病毒遺傳穩(wěn)定性和免疫劑量研究.pdf

1、豬瘟(Classicalswinefever,CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬和野豬的一種高度致死性、接觸性傳染病，是嚴(yán)重威脅全球養(yǎng)豬業(yè)的疫病之一。豬瘟疫苗的免疫接種是預(yù)防豬瘟的一種有效手段。本文對豬瘟候選疫苗CSFVE0-E2基因重組雞痘病毒活載體疫苗的毒種遺傳穩(wěn)定性和疫苗免疫劑量進(jìn)行了研究，獲得了以下結(jié)果。 1.將重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細(xì)胞上連續(xù)傳了20代，取第5、10、15和20代重組病毒，分

2、別用藍(lán)斑試驗(yàn)、PCR擴(kuò)增和基因序列分析以及間接免疫熒光試驗(yàn)研究了重組病毒的遺傳穩(wěn)定性。結(jié)果各代次的重組病毒產(chǎn)生的蝕斑均為藍(lán)色，從各代重組病毒DNA中均擴(kuò)增出了E0和E2基因，基因序列分析發(fā)現(xiàn)僅第20代重組病毒插入基因發(fā)生2個點(diǎn)突變，即E0基因139A→G，E2基因413A→G。間接免疫熒光也能夠檢測到目的蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細(xì)胞上傳20代以內(nèi)具有良好的遺傳穩(wěn)定性，插入的CSFVE0-E2基因能

3、夠正確穩(wěn)定表達(dá)。 2.用CEF細(xì)胞擴(kuò)增了3批重組雞痘病毒rFPV-E0-E2，并對其進(jìn)行了純度、病毒含量、特異蛋白的表達(dá)的檢測和無菌檢驗(yàn)。結(jié)果表明，3批重組病毒rFPV-E0-E2具有較高純度，無細(xì)菌和霉菌污染，其TCID50分別為10-7.5·/0.025mL、10-9/0.025mL和10-9/0.025mL，并且均能夠正常表達(dá)CSFVE0-E2基因，擬作為疫苗的原始毒種種子批使用。同時，實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)并檢驗(yàn)了1批豬瘟病毒E0-

4、E2基因重組雞痘病毒活載體疫苗毒，測得CSFVShimen株對50～60日齡的豬瘟易感豬的LD50為10-2.8/2mL，為進(jìn)行豬瘟病毒E0-E2基因重組雞痘病毒免疫劑量試驗(yàn)提供了材料和依據(jù)。 3.使用變量免疫定量攻毒方法進(jìn)行了CSFV基因重組雞痘病毒的免疫劑量試驗(yàn)。將23頭豬隨機(jī)分成6組，分別以不同程序免疫不同劑量的重組雞痘病毒。免疫后28d，每頭豬經(jīng)頸部肌肉注射100LD50的Shimen株CSFV，繼續(xù)觀察21d，評價疫苗