光合細菌的菌種分離和菌種保存技術

1、4光合細菌的菌種分離和菌種保存技術光合細菌的菌種分離和菌種保存技術菌種的分離，是從它生活的環(huán)境中，與混雜的微生物群分離出來。這是獲得優(yōu)良菌株最基本且必要的手段。菌種大量培養(yǎng)菌種大量培養(yǎng)目前應用於有機廢水淨化和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上的光合細菌，主要是紅螺菌科中稱為紫色非硫細菌中的一些種類，包括紅螺菌屬（Rhodosirillum）、紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）、和紅微菌屬（Rhodomicrobium）在內(nèi)的三個屬，共同特徵是具

2、鞭毛有運動性，不產(chǎn)生氣泡，細胞內(nèi)不積累硫化物。採樣：採樣：光合細菌生長條件，主要有水、有機質(zhì)和厭氧環(huán)境。因此，在河底、海底的泥土及水田、溝渠等經(jīng)常含有有機物的泥土上，有著呈橙黃色、粉紅色塊狀沉積物的泥土，都可以採取分離光合細菌的樣品。培養(yǎng)方式：培養(yǎng)方式：目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖上應用的光合細菌，主要是光合異營型紅螺菌科，其中以紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）為主。採用的養(yǎng)殖方法有兩種，全封閉的厭氣光照培養(yǎng)方式，開放式的微氣光照培養(yǎng)

3、方式。全封閉式的厭氣光照培養(yǎng)採用無色透光的容器，消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，將容器中灌滿培養(yǎng)液，加蓋造成厭氣的培養(yǎng)環(huán)境。，置於有陽光的地方或用人工光源進行培養(yǎng)，達到指數(shù)生長期高峰時，可作為菌種器液接種。開放試微氣光照培養(yǎng)可採用100200L容量的的塑膠桶或500L容量的豐年蝦孵化桶為培養(yǎng)容器。在底部裝打氣石，培養(yǎng)時微充氣，使桶內(nèi)光合細菌上下緩緩翻動。在桶的正上方約30cm左右加裝人工光源，使液面照度達2000lux。容

4、器消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，照明，微充氣培養(yǎng)。培養(yǎng)基培養(yǎng)基對培養(yǎng)光合自營型細菌，一般用無機鹽為基礎培養(yǎng)基，加入適量的碳酸氫鹽作為二氧化碳的來源，用磷酸調(diào)整pH7.0~8.0，然後加入0.05~0.1%的Na2S9H2O作為電子供體和供氫體，在光照厭氣環(huán)境，20~30℃培養(yǎng)。培養(yǎng)光合異營型的細菌則需在無機鹽培養(yǎng)基中再加入0.2%酵母膏、0.25%乙酸鈉、0.02%丙酸鈉和5%NaHCO3，調(diào)整其pH至7.08.0，根據(jù)

5、環(huán)境需求而定。紅螺菌科配方紅螺菌科配方滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉澱砂濾後的水用漂白液消毒後使用。培養(yǎng)基配製根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。接種培養(yǎng)基配好後，應立即進行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的接種量需求較高，一般為20％～50％，即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1

6、：4～1：1，不應低於20％，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應高些，否則光合細菌在培養(yǎng)液中很難佔絕對優(yōu)勢，影響最終產(chǎn)量和質(zhì)量。培養(yǎng)管理光合細菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個方面。日常管理和測試攪拌和打氣：光合細菌培養(yǎng)過程中必須幫助沉澱的光合細菌上浮獲得光照，保持菌細胞的良好生長。大型厭氣培養(yǎng)則用機械攪拌或使用小型沉水馬達使水緩慢循環(huán)，保持菌體懸浮。微氣培養(yǎng)是通過打氣幫助菌體上浮，

7、因為打氣會使溶氧含量增加，光合細菌繁殖受到抑制，所以必須嚴格控制供氣量。一般採用定時斷續(xù)充氣，充氣量控制在1～1.5L／（Lhr）之間，溶解氧量保持在1ppm以下。調(diào)節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細菌需要連續(xù)進行照明。白天可利用日光培養(yǎng)，晚上則使用人工光源，或完全利用人工光源培養(yǎng)。一般培養(yǎng)光照強度應控制在2000～5000lx之間。如果光合細菌細胞密度高，則光照強度應提高到5000～10000lx。調(diào)節(jié)溫度：光合細菌對溫度的適應範圍在23～39℃內(nèi)

8、，均能正常生長繁殖，可不必調(diào)整溫度。常溫下培養(yǎng)也可通過調(diào)整，將溫度控制在光合細菌生長繁殖最適宜的範圍。酸鹼度的測定和調(diào)整：培養(yǎng)光合細菌必須注意酸鹼度的變化。光合細菌大量繁殖時，菌液pH值上升，此時為指數(shù)生長期。但當pH值超過生長的適應範圍時，光合細菌生長下降。如果能及時調(diào)整，使pH值保持在最適範圍，則光合細菌能繼續(xù)生長繁殖。測定和調(diào)整pH值，可以讓光合細菌保持在指數(shù)生長期。一般採用加酸的辦法來降低酸鹼值。醋酸、乳酸和鹽酸均可使用，最常用