需氧革蘭陽性桿菌

1、需氧革蘭陽性桿菌,芽胞桿菌屬Bacillus李斯特菌屬Listeria丹毒斯菌屬Erysipelothrix加德納菌屬Gardnerella,需氧芽胞桿菌屬（Bacillus）48個種 與醫(yī)學有關(guān)5個種 炭疽芽胞桿菌（B.anthracis） 蠟樣芽胞桿菌（B.cereus） 蕈狀芽胞桿菌（B.mycoides） 巨大芽胞桿菌（B.megaterium） 蘇云金芽胞桿菌（B.thuringiensis）,臨床意義,引

2、起人、蓄共患的急性傳染病，包括皮膚炭疽、肺炭疽、腸炭疽、敗血性炭疽，烈性傳染病, 死亡率極致病因子：莢膜：抗吞噬，有利于細菌在組織內(nèi)繁殖擴散炭疽毒素：保護性抗原、致死因子、水腫因子病后可獲得持久免疫力,炭疽芽胞桿菌,炭疽芽胞桿菌,革蘭陽性大桿菌，兩端截平，竹節(jié)狀排列，有芽胞、無鞭毛、可有毒株有莢膜，芽胞橢圓形，小于菌體，位于菌體中央，多在有氧條件下形成，25～30℃，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動物尸體解剖后暴露在空氣中，都易形成芽胞在

3、活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞，尸體嚴禁解剖,普瓊平板：灰色、粗糙型菌落；卷發(fā)狀邊緣（低倍鏡下）BAP：不溶血NaHCO3 BAP： －－有毒株產(chǎn)生莢膜呈黏液型菌落，挑取時呈粘絲狀(鑒別要點) －－無毒株—粗糙型菌落,培養(yǎng)特性,肉湯培養(yǎng)基：絮狀沉淀明膠—37℃18～24h表面液化成漏斗狀，由于細菌沿穿刺線向四周擴散形成倒松樹狀。,生化反應(yīng),葡萄糖+ 、麥芽糖+ 、蔗糖+、卵磷脂酶弱+、觸酶+硝酸鹽還原試驗+、

4、VP＋、吲哚－、硫化氫－、檸檬酸鹽－、尿素－明膠液化＋胨化牛乳：在牛乳中生長2～4天后牛乳凝固并緩慢胨化,抗原,菌體多糖抗原：與毒力無關(guān)，耐熱，特異性不高，病獸臟器皮毛加熱后仍可與相應(yīng)抗體反應(yīng)，稱Ascoli熱沉淀反應(yīng)莢膜多肽抗原：抗吞噬，與毒力有關(guān)芽胞抗原：炭疽毒素Anthrax toxin： 由保護性抗原、致死因子、水腫因子形成。,抵抗力,耐熱、耐干燥對氧化劑敏感對青霉素、磺胺類抗生素敏感,微生物學檢查,標本的采集：分

5、泌物、痰、血液、糞便、嘔吐物、腦脊液等，嚴禁宰殺解剖死蓄。標本的處理：液體標本取沉渣分離培養(yǎng)；固體標本用生理鹽水浸泡，水浴殺死非芽胞菌；血液、臟器、滲出液增菌或直接分離培養(yǎng),痰、嘔吐物、CSF及炎癥分泌物,2%兔血清肉湯快速增菌37℃4h,莢膜熒光抗體染色或莢膜腫脹試驗,直接涂片,莢膜染色 G染色,初步報告,0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖,涂片G染色、莢膜染色,初步報告,,,,,,,,,,,,,,,,,快速檢驗程序,核酸

6、檢測,,Ascoli試驗,,皮毛、腐敗臟器等,生化反應(yīng),噬菌體裂解,青霉素抑制,毒力試驗,皮毛、腐敗臟器等,血液,以NG制成懸液經(jīng)加溫或飽和尿素處理,肉湯增菌培養(yǎng),BAP或戊烷脒平板,2%兔血清肉湯4－8h,G染色鏡檢,菌落特征,動力觀察,串珠試驗,,,,,,,,,,,,確定報告,,,,莢膜腫脹試驗,分離培養(yǎng)檢驗程序,法定報告?zhèn)魅静?，發(fā)現(xiàn)疑是病例應(yīng)于24小時內(nèi)上報CDC,戊烷脒多粘菌素瓊脂,基礎(chǔ)培養(yǎng)基 25μg/L戊烷脒:

7、殺滅利什曼原蟲等寄生蟲 3000IU/L多粘菌素 2%脫纖維羊血,檢驗方法,涂片染色：革蘭陽性大桿菌、竹節(jié)狀排列、有明顯莢膜和芽胞—初步報告莢膜熒光抗體染色或莢膜腫脹試驗核酸檢測：核酸雜交分離培養(yǎng)：BAP或戊烷脒多粘菌素B等選擇性培養(yǎng)基。 2%兔血清肉湯增菌→分離培養(yǎng),菌落特征形態(tài)染色生化試驗:表13－1串珠試驗: 接種于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉湯中，37℃ 6h，大而均勻成串的圓球狀菌體

8、，與青霉素抑制細菌細胞壁合成有關(guān)，類炭疽無此現(xiàn)象,鑒定試驗,接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，37℃24h 生長 受抑制不生長 串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗：,,,,兔血瓊脂平板,抑菌環(huán),青霉素紙片,,,,,,,青霉素抑制試驗,串珠形成區(qū),,噬菌體裂解試驗：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗：接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血

9、清的平板，10%CO2、37℃、24～48h，有毒株形成莢膜—黏液型菌落，無毒株不形成莢膜—粗糙型菌落 毒素動物試驗：小鼠、家兔或豚鼠皮下接種植物凝集素試驗：熒光或酶標記PHA與菌體多糖反應(yīng)Ascoli熱沉淀試驗：可作追溯性診斷,其它實驗,臨床意義,食物中毒：含菌量達105/g以上，夏、秋季多見，中毒食物大多無腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應(yīng)引起注意 嘔吐型——耐熱腸毒素 腹瀉型——不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)

10、膜炎、敗血癥和腦膜炎,蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus,蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus,形態(tài)：革蘭陽性大桿菌、兩端鈍圓、有芽胞、周鞭毛、無莢膜培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度30~35℃，營養(yǎng)要求不高。 普通瓊脂平板：菌落較大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有蠟樣光澤 BAP 有β溶血 卵黃平板—生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的

11、混濁環(huán)，稱乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng),生化反應(yīng),葡萄糖＋、蔗糖＋、麥芽糖＋等卵磷脂酶+ 、VP＋胨化牛乳＋、液化明膠＋，多次傳代后生化特性常可改變,微生物學檢查,嘔吐物、殘留食物等,活菌計數(shù),接種BMBAP卵黃瓊脂平板,37℃18~24h,直接涂片染色鏡檢,動物試驗,生化反應(yīng),血清凝集,報告結(jié)果,,,,,,,,,,,,,結(jié)果解釋,因食品暴露于空氣中，在一定程度都會受到本菌污染，所以不能分離出該菌就認為是引起食物中毒的病原菌。從食物

12、中分離出菌數(shù)≥105CFU/g，提示本菌活躍生長，構(gòu)成潛在危險從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或)嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型,三、枯草芽胞桿菌,生物學性狀——形態(tài)染色,革蘭陽性大桿菌、兩端鈍圓有芽胞、無莢膜、有鞭毛,培養(yǎng)特性,BM：灰白色、不透明、干燥、鋸齒狀粗糙大菌落BAP：β溶血大菌落,生化反應(yīng),觸酶+葡萄糖＋、甘露醇＋、木糖＋、阿拉伯糖－串珠試驗－卵磷脂酶－,炭疽芽胞桿菌與其他需氧芽胞桿菌的鑒別,鑒別項目

13、 炭疽芽胞桿菌 枯草芽胞桿菌 蠟樣及其他芽胞桿菌形態(tài) 菌體兩端平截、長鏈 兩端鈍園、短鏈 兩端鈍園、短鏈莢膜 多肽莢膜 － －動力

14、 － + +菌落 卷發(fā)狀，有毒株為M型 鋸齒狀、R型 蠟樣或R型肉湯生長 絮狀沉淀、上層清 形成菌膜 均

15、勻混濁有菌膜卵磷脂酶 + － ++溶血反應(yīng) 不溶或微溶血 β溶血 β溶血Ascolis試驗 +

16、 － －串珠試驗 + － －青霉素抑制試驗 + －

17、 －植物凝集素試驗 + － －莢膜腫脹試驗 + － －／熒光

18、抗體染色動物毒力試驗 + － 蠟樣芽胞桿菌的腸毒素可致小鼠等動物發(fā)病致死，但不產(chǎn)生莢膜，其他需氧芽胞桿菌（－） 噬菌體裂解試驗 + －

19、 －,李斯特菌屬,產(chǎn)單核細胞李斯特菌紅斑丹毒絲菌,一、產(chǎn)單核細胞李斯特菌生物學性狀,革蘭陽性短小桿菌成雙排列有鞭毛（18~20℃有動力；37℃動力緩慢），無芽胞，無莢膜4℃可生長BAP：灰白色菌落，有狹窄的β溶血環(huán)半固體培養(yǎng)基：倒傘形生長,生化反應(yīng),發(fā)酵多種糖類硝酸鹽還原試驗－甲基紅+V－P試驗+,抵抗力,耐堿不耐酸對熱敏感對多種抗生素敏感（首選氨芐青霉素） 對磺胺、桿菌肽、多粘菌素耐藥,臨床意義,主

20、要引起腦膜炎、敗血癥傳播途徑：糞－口途徑，胎盤和產(chǎn)道致病因子：溶血素和菌體表面成分,微生物檢查,標本,涂片革蘭染色鏡檢,熒光抗體染色,動力檢查（25℃，37℃）,血液,肉湯增菌,,腦脊液沉淀物,咽喉拭子、組織、糞便冷增菌,接種羊血瓊脂平板,生化反應(yīng),血清學試驗,動物試驗,,,,,,,,,,,,,,,,,,二、紅斑丹毒絲菌,革蘭陽性桿菌，無芽胞，無鞭毛，無莢膜厭氧或微需氧BAP：形成兩種菌落——光滑型小菌落和粗造型大菌落。發(fā)酵

21、葡萄糖及乳糖、液化明膠、產(chǎn)生硫化氫主要引起家畜感染及人類丹毒,加德納菌屬,陰道加特納菌,生物學性狀,多形性，單個或成雙排列，染色不定（視菌齡和菌種而定：臨床株G+，保存株 G－），無芽胞、無莢膜、無鞭毛兼性厭氧，營養(yǎng)要求高，BAP：可有β溶血葡萄糖＋、麥芽糖＋、蔗糖＋氧化酶－、觸酶－對青霉素類敏感、對磺胺類耐藥,臨床意義,與非特異性陰道炎（BV）有關(guān) BV是陰道內(nèi)乳酸桿菌被另一組厭氧菌為主的細菌取代，同時

22、伴有陰道分泌物性質(zhì)改變的一組綜合征。 主要病因為陰道內(nèi)乳酸桿菌大量減少，伴有陰道加特納菌、類桿菌、消化球菌及支原體大量增殖。,微生物學檢查,分泌物（陰道、宮頸）,涂片染色鏡檢,分離培養(yǎng)（5%人血平板）,β －溶血菌落,純培養(yǎng)（5%人血平板）,觸酶、氧化酶（－）,初步報告,GV的主要鑒定試驗,,,,,,,,,,最后報告,,本章要點,概念：串珠試驗、 Ascoli熱沉淀試驗、青霉素抑制試驗、 NaHCO3毒力試驗炭疽