薄層層析,顯色劑

1、薄層層析溶劑薄層層析溶劑展開劑展開劑顯色劑的選擇配制及注意事項顯色劑的選擇配制及注意事項摘要：薄層色譜方法總結(jié)：使用的溶劑必須是“分析純”或“色譜純”，溶劑組成采用體積量比(如正丁醇冰乙酸水=4：1：1，VVV)，或者絕對量(如18ml甲苯2ml甲醇)。其總量應(yīng)足以使TLCHPTLC板的浸入深度約為5mm。展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相(上層或下層)，備用相關(guān)專題薄層層析（TLC）技術(shù)薄層色

2、譜方法總結(jié)1.方法原理(1)流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相。(2)樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由于偶極(誘導(dǎo))偶極相互作用，氫鍵和范德華力的作用而產(chǎn)生不同程度的延緩、吸附、分散、離子交換和絡(luò)合等分離機理。2.溶劑使用的溶劑必須是“分析純”或“色譜純”，溶劑組成采用體積量比(如正丁醇冰乙酸水=4：1：1，VVV)，或者絕對量(如18ml甲苯2ml甲醇)。其總量應(yīng)足以使TLCHPTLC板的浸入深度約為5mm。展開劑要求新

3、鮮配制，不要多次反復(fù)使用如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相(上層或下層)，備用。一、溶劑選擇規(guī)則：1、考慮分離成分的極性、溶解度、吸附度。2、先加入極性較小的溶劑，若不容再加入少量極性大的溶劑3、一般根據(jù)相似相溶原則，需要注意，極性相差大的不混溶。4、混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑。5、展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一

4、個分離效果好的展開劑。6、一般把兩種溶劑混合時采用高極性低極性的體積比為13的混合溶劑如果有分開的跡象再調(diào)整比例(或者加入第三種溶劑)達到最佳效果如果沒有分開的跡象(斑點較“拖”)，最好是換溶劑。二、展開劑的選擇條件：①對的所需成分有良好的溶解性②可使成分間分開②待測組分的Rf在0.2~0.8之間，定量測定在0.3～0.5之間③不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)⑤沸點適中，黏度較?、拚归_后組分斑點圓且集中⑦混合溶劑最好用新鮮配制。三、溶劑

5、極性參數(shù)表環(huán)已烷:0.2、石油醚(Ⅰ類，30~60℃)、石油醚(Ⅱ類，60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、異丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氫呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以

6、達到好的分離效果，適合于酸丁酯甲酸水(7:2.5:2.5)。結(jié)論：這類物質(zhì)多數(shù)是苯乙烯母核的，這個結(jié)構(gòu)的極性本身比較大，另外有酚羥基和羧酸基團，個別有多羥基配基。皂苷的展開劑差不多，極性大。注意甲酸通常指的是濃度85%左右的，含有水。4、類含氮有機物：鹽酸小檗堿：苯醋酸乙酯甲醇異丙醇濃氨試液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸氣飽和)或正丁醇冰醋酸水(7:1:2)、麻黃堿：氯仿甲醇濃氨試液(20:5:0.5)或正丁醇冰醋酸水(8:2:1)

7、甘草酸銨：醋酸乙酯甲酸冰醋酸水(15:1:1:2)。結(jié)論分析：由于NH2硅醇基的作用很強，在強極性展開劑加有機酸、有機堿掃尾。對于極性化合物，使用正丁醇對斑點擴散影響較小，因為化合物和硅膠的作用強。當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑(如以硅藻土或滑石粉代替硅膠)，則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。3.TLC的通用顯色方法理想的顯色希望靈敏

8、度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：EmT2KgV“pFg4244131、紫外照射法：方便、不破壞樣品PloEr“m?zsdT$V4244132、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用$b8M“(P[e4244133、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯小木蟲學(xué)

9、術(shù)博客JM0D6Rfr4、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。4.薄層層析和紙色譜操作注意事項1、點樣點樣器點樣于薄層板上一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點樣，但應(yīng)待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣，以防樣點過大，造成拖尾、擴散等現(xiàn)象，而影響分離效果。點樣時必須注意勿損傷薄層表面2、展開將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，

10、浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜，密封，待展開至規(guī)定距離(一般為8～15cm)，取出薄層板，晾干，待檢測。注：展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持1530分鐘。3、顯色與檢視供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對于可見光下無色，但在紫外光下有吸收