mnu致大鼠視網(wǎng)膜變性對(duì)m252;ller細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文MNU致大鼠視網(wǎng)膜變性對(duì)Müller細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名：王芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：周?chē)?guó)民20060510復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文二、結(jié)果1 、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，M N U 注射后1 d 視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡率最高，達(dá)3 0 ％，以后細(xì)胞凋亡率逐漸下降。第2 、3 d 的凋亡率分別為2 8 ％和1 1 ％，至5 d 左右凋亡現(xiàn)象消失。T U N E L 法顯示，M N U 注射后

2、第2 d 視網(wǎng)膜外核層出現(xiàn)成片凋亡的細(xì)胞。2 、免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，正常大鼠視網(wǎng)膜M u l l e r 細(xì)胞有G S 表達(dá)，M u l l e r細(xì)胞的輪廓清晰，細(xì)胞核位于內(nèi)核層，突起呈典型的放射狀，向內(nèi)側(cè)和外側(cè)延伸，分別止于內(nèi)界膜至外界膜。3 、M N U 損傷后第2 d 及3 d ，外核層還比較厚，r h o d o p s m 陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞有很多層；損傷后第5 d ，外核層變得非常薄，r h o d o p s i n 陽(yáng)性表

3、達(dá)細(xì)胞也只有一層，細(xì)胞數(shù)量稀少；至損傷后第7 d ，r h o d o p s i n 陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞雖也只有一層，但是細(xì)胞數(shù)量較第5 d 時(shí)增多。在損傷后第5 d ，未見(jiàn)G S 和r h o d o p s i n 的共表達(dá)現(xiàn)象，而損傷后第7 d ，G S 和r h o d o p s m 的共表達(dá)現(xiàn)象則非常明顯。4 、注射M N U 后，大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)核層即開(kāi)始有P C N A 的表達(dá)，并與G S 共存。P C N A 的表達(dá)在M N

4、U 注射后第3 d 達(dá)最高峰，至5 d 左右P C N A 的表達(dá)逐漸向外核層轉(zhuǎn)移。與此同時(shí)， M U l l e r 細(xì)胞也開(kāi)始表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞抗原n e s t i n ，并且，隨著損傷時(shí)間的延長(zhǎng)，n e s t i n 的表達(dá)也逐漸增強(qiáng)。5 、腹腔注射M N U 后，R T - P C R 檢測(cè)顯示I G F ，b F G F ，H G F 等生長(zhǎng)因子以及C y c l i n D l 的表達(dá)均有變化。與對(duì)照組相比，I G F ，b

5、 F G F ，H G F 以及C y c l i n D l的表達(dá)均增強(qiáng)。6 、體外培養(yǎng)3 6 h 后，M u l l e r 細(xì)胞基本貼壁，伸出突起，并逐漸延長(zhǎng)，1 0 d左右細(xì)胞匯合，相鄰細(xì)胞連接成網(wǎng)狀。顯微鏡下可將細(xì)胞分為2 層：底層細(xì)胞較大，折光性較弱，多為M u l l e r 細(xì)胞；上層細(xì)胞折光性強(qiáng)，有立體感，且分支較多，多為各種神經(jīng)元。培養(yǎng)約4 ～5d 左右細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶底后即可傳代，傳一代約需要5 ～6d 左右。傳2