外源性wnt5a激活k562細(xì)胞wnt5aca39;2信號傳導(dǎo)途徑及其生物學(xué)效應(yīng)研究

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文外源性Wnt5a激活K562細(xì)胞Wnt5a/Ca信號傳導(dǎo)途徑及其生物學(xué)效應(yīng)研究姓名：李招權(quán)申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：鄒全明20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文影響；以D N AL a d d e r 電泳和A 0 厄B 染色法，觀察外源性W n t 5 a 對細(xì)胞凋亡的影響；細(xì)胞以瑞氏染液染色，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，并利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測細(xì)胞表面分化抗原C D l 3 、C D

2、4 1 、C D 6 8 和G l y A 的表達(dá)變化，觀察外源性W n t 5 a 對細(xì)胞分化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 ．w n t 5 a 在髓細(xì)胞白血病病例樣本及K 5 6 2 、H L ．6 0 細(xì)胞中表達(dá)缺失，而B ．c a t e n i n在多數(shù)髓細(xì)胞白血病病例樣本及l(fā) ( 5 6 2 細(xì)胞和J u r k a t 細(xì)胞呈高表達(dá)。2 ．分別利用重組腺病毒A d W n t 5 a 、A d G F P 感染C H O 細(xì)胞，成功

3、制備W n t 5 a 及G F P條件培養(yǎng)液，經(jīng)w e s t e m b l o t 鑒定w n t 5 a 條件培養(yǎng)液含w n t 5 a 蛋白，而G F P 條件培養(yǎng)液無表達(dá)。3 ．G F P 條件培養(yǎng)液不能促進(jìn)K 5 6 2 細(xì)胞C a 2 + 內(nèi)流，而W n t 5 a 條件培養(yǎng)液可促進(jìn)K 5 6 2細(xì)胞C a 2 + 內(nèi)流，且這種作用可被W n t 5 a 抗體抑制。4 ．w n t 5 a 條件培養(yǎng)液培養(yǎng)不能下調(diào)K 5

4、6 2 細(xì)胞p —c a t e n i n 訓(xùn)[ ⅢA 的表達(dá)，但能下調(diào)K 5 6 2 細(xì)胞p ．c a t e n i n 及c y c l i nD l 蛋白的表達(dá)。5 ．W n t 5 a 條件培養(yǎng)液對l ( 5 6 2 細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)有：細(xì)胞增殖明顯受抑制；細(xì)胞周期分布G l 期細(xì)胞比例增多，S 期及G 2 期細(xì)胞比例減少；細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)了向成熟細(xì)胞分化的特征，細(xì)胞表面分化抗原C D l 3 、C D 4 1 及G l v A

5、 表達(dá)變化不明顯，C D 6 8 表達(dá)陽性率顯著升高；細(xì)胞D N A L a d d e r 電泳未出現(xiàn)明顯梯形條帶，激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡率無明顯變化。研究結(jié)論1 ．W n t 5 a 表達(dá)缺失和p —c a t e n i n 高表達(dá)可能是髓細(xì)胞白血病的發(fā)生相關(guān)因素。2 ．外源性W n t 5 a 可激活K 5 6 2 細(xì)胞非經(jīng)典w n t 5 a ／C a 2 + 信號傳導(dǎo)途徑，并在蛋白水平下調(diào)K 5 6 2 細(xì)胞p ．c

6、a t e n i n 及c y c l i nD 1 表達(dá)，提示在l 西6 2 細(xì)胞中，外源性w n t 5 a 可抑制W n t ／D - c a t e n i n 信號傳導(dǎo)途徑。3 ．外源性w n t 5 a 可使飚6 2 細(xì)胞發(fā)生G l 期阻滯，抑制K 5 6 2 細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)K 5 6 2細(xì)胞向單核細(xì)胞分化，但無誘導(dǎo)K 5 6 2 細(xì)胞凋亡作用。關(guān)鍵詞：W n t 5 a ；l 為6 2 細(xì)胞；C a 2 + ；w n