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文檔簡介
1、分類號豳3 = 3 3U D C碩士學位論文密級公本釀酒酵母乙醇發(fā)酵工業(yè)菌株的R A P D分析與基因工程改造曹樹威學科專業(yè) 微生物堂指導老師 黃旦這麴拯論文答辯日期2 Q ! 三生§且2 2 旦 學位授予日期2 Q ! 圣生魚且墊毋答辯委員會主席 值勇強熬攫釀酒酵母乙醇發(fā)酵工業(yè)菌株的R A P D 分析與基因工程改造摘要甘蔗糖蜜作為我國南方蔗糖產區(qū)主要的乙醇發(fā)酵工業(yè)生產原料,具有低成本,不耗糧,并可解決制糖業(yè)污染等優(yōu)點,對其
2、乙醇發(fā)酵的研究一直是研究的重點,其中很關鍵的問題是獲得高性能的菌種,菌株的鑒定及選育具有重要意義。因此本論文工作主要從兩方面展開,首先選擇單細胞形態(tài)及甘蔗糖蜜乙醇發(fā)酵表型不同的7 株釀酒酵母工業(yè)菌株為研究對象,利用R A P D 技術進行核基因組多態(tài)性分析鑒定,以探討釀酒酵母核基因組多態(tài)性與相關性狀的關系;然后以全基因組分析為基礎進一步對菌株進行改造,以選育高性能的甘蔗糖蜜乙醇發(fā)酵釀酒酵母菌種。為滿足實驗進程要求,本實驗建立了一種P C
3、 R 模板高通量制備法,可以在3m i n 內完成一株釀酒酵母的P C R 模板制備工作。I T S 擴增及測序結果證實該法擴增目標條帶的專一性。釀酒酵母不同長度核基因的擴增及R A P D 擴增,證實該法相對于C T A B 基因組法,具有時間短,操作簡單等優(yōu)勢?;赑 C R 模板高通量制備法進行R A P D 實驗,先對2 2 種隨機引物進行篩選。利用8 種引物對7 株釀酒酵母工業(yè)菌株進行R A P D 分析,結果表明,系列菌株間
4、的相似性系數在0 .4 7 .0 .9 6 之間,高產菌株1 0 1 5 .0 4 .0 1 與高產菌株1 0 0 2 .0 3 .0 3 之間的相似性最高,而高產菌株1 0 1 5 .0 4 .0 1 與低產菌株1 4 1 5 相似.性最低。利用U P G M A 法進行聚類分析,高產菌株1 0 1 6 .0 2 .0 4 ,低產菌株1 4 1 5及低產菌株1 3 1 3 聚為一大類,而1 4 1 5 與1 3 1 3 又聚為一小類,
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