蟬擬青霉深層發(fā)酵及其胞內(nèi)多糖的結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本研究主要探究中藥水提物對(duì)蟬擬青霉（Paecilomyces cicadae）液體深層發(fā)酵的影響，并從菌絲體中提取得到胞內(nèi)多糖，對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。因此，本論文分為以下兩部分:
　　1.研究不同中藥對(duì)蟬擬青霉深層發(fā)酵的影響。1）通過(guò)分別向培養(yǎng)基中添加不同的中藥水提物進(jìn)行蟬擬青霉液體發(fā)酵培養(yǎng)，探究其對(duì)蟬擬青霉發(fā)酵過(guò)程中生物量、胞外和胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量及其活性的影響。結(jié)果表明，黃芪、薏苡仁、枸杞的水提物分別對(duì)蟬擬青霉生物量、胞外和胞內(nèi)多

2、糖的合成促進(jìn)效果最為顯著，分別較對(duì)照試驗(yàn)提高了135.82％、48.90％、137.18％;而金銀花和山楂水提物不利于蟬擬青霉的發(fā)酵培養(yǎng);對(duì)于產(chǎn)物活性，結(jié)果顯示枸杞水提物能同時(shí)顯著提高蟬擬青霉胞外和胞內(nèi)多糖對(duì)DPPH自由基的清除能力，分別為對(duì)照試驗(yàn)的1.17倍和1.38倍。2）綜合考慮胞內(nèi)、胞外多糖產(chǎn)量、菌體生物量和多糖活性后，確定枸杞水提物是最適合蟬擬青霉液體深層發(fā)酵的中藥成分，其最佳添加量為10 g/L。
　　2.對(duì)蟬擬青霉胞

3、內(nèi)多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。1）蟬擬青霉菌絲粉末，經(jīng)熱水提取、醇沉分離、脫蛋白、透析，得到水溶性粗多糖，命名為PCIPS，提取率為4.2％。再經(jīng)DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠層析分離純化，得到均一多糖組分PCIPS2。2）經(jīng)高效液相色譜(HPLC)、紅外光譜(IR)、甲基化和1D/2D核磁(NMR)分析，發(fā)現(xiàn)PCIPS2主要由甘露糖、半乳糖、鼠李糖和葡萄糖組成，摩爾比為48.2

4、1∶6.89∶2.37∶1.0，其主鏈結(jié)構(gòu)為(1→4)連接β-L-Rhap殘基和(1→6)連接的α-D-Manp殘基，支鏈為(1→4)連接的α-D-Galp殘基和端基α-D-Glcp，并連接在α-D-Manp殘基的O-3位。3）多糖的構(gòu)象采用尺寸排阻色譜與光散射儀、示差檢測(cè)器和粘度計(jì)（SEC-MALLS-IR-VIS）聯(lián)用測(cè)定。結(jié)果顯示PCIPS2的分子量（Mw）、均方根旋轉(zhuǎn)半徑(＜S2＞z1/2)、流體力學(xué)半徑（Rh）和特性黏度（[η

5、]）分別為3.09×104 Da、7.8nm、3.6 nm和8.5 mL/g。其Mark-Houwink方程和Rh vs Mw關(guān)系的指數(shù)α、v分別為0.57和0.51，均表明多糖PCIPS2在0.1 MNaNO3溶液中為柔順鏈構(gòu)象。PCIPS2的蠕蟲鏈模型構(gòu)象參數(shù)為單位摩爾圍長(zhǎng)(ML)=379 nm-1，持續(xù)長(zhǎng)度(q)=0.74 nm，直徑(d)=0.82 nm，該多糖在溶液中的鏈構(gòu)象經(jīng)原子力顯微鏡(AFM)觀測(cè)得到了進(jìn)一步證明。本研究