長非編碼RNA-AK003290在成肌細(xì)胞增殖和分化過程中的功能研究.pdf

1、長非編碼RNA(Long noncoding RNAs，LncRNA)廣泛存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，是一個(gè)轉(zhuǎn)錄本長度大于200個(gè)核苷酸，不編碼蛋白質(zhì)的RNA。研究發(fā)現(xiàn)，長非編碼RNA對許多的生命活動(dòng)具有十分重要的作用，lncRNA廣泛參與了機(jī)體免疫、肌肉分化以及生長發(fā)育的各個(gè)過程?；谇捌谘芯拷Y(jié)果，獲得了一個(gè)在肌組織中高表達(dá)的lncRNA-AK003290。本研究以小鼠C2C12細(xì)胞為研究模型，利用RNA干擾和超表達(dá)技術(shù)研究了lncRNA-A

2、K003290對成肌細(xì)胞增殖和分化的影響。具體的研究結(jié)果如下:
　　1、本研究首先利用RACE和Northern blot技術(shù)獲得了AK003290的全長，其次通過CPC軟件對該基因的編碼能力進(jìn)行了預(yù)測，發(fā)現(xiàn)AK003290無蛋白編碼能力;且AK003290在肌肉組織中高表達(dá)，在成肌細(xì)胞分化的過程中AK003290的表達(dá)量持續(xù)上升，核質(zhì)定位的結(jié)果表明在增殖期AK003290在細(xì)胞核表達(dá)，隨著成肌細(xì)胞的分化，AK003290不斷出細(xì)

3、胞核，在成肌細(xì)胞分化3天時(shí)核質(zhì)均有分布。
　　2、通過干涉和超表達(dá)實(shí)驗(yàn)對增殖的兩個(gè)標(biāo)志基因ki67和N-Ras的mRNA和蛋白水平進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)基因的表達(dá)量沒有變化，同時(shí)運(yùn)用RTCAxCELLigence系統(tǒng)和Edu染色對上述的結(jié)果做了進(jìn)一步的驗(yàn)證，結(jié)果顯示AK003290對成肌細(xì)胞增殖沒有顯著影響。
　　3、通過實(shí)時(shí)定量PCR、western blot和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)研究干涉和超表達(dá)AK003290基因后對成肌細(xì)

4、胞分化的影響，干涉AK003290后，分化標(biāo)志基因MyHC、MyoG、MyoD和Trdn的mRNA水平均顯著降低，MyHC和MyoG的蛋白水平表達(dá)量也明顯降低，免疫熒光檢測結(jié)果表明細(xì)胞融合率下降，阻滯成肌細(xì)胞向肌管分化;超表達(dá)結(jié)果同干涉結(jié)果相反，證實(shí)了AK003290正向調(diào)控成肌細(xì)胞的分化，另外，通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了AK003290能夠促進(jìn)成肌細(xì)胞的遷移。
　　4、利用基因芯片篩選了被AK003290調(diào)控的下游靶基因，其中上調(diào)差