基于傳統(tǒng)純培養(yǎng)及宏基因組文庫(kù)方法研究海洋來(lái)源蛋白酶及微生物多樣性.pdf

1、謹(jǐn)以此論文獻(xiàn)給一直關(guān)懷與支持我的導(dǎo)師、朋友及家人!基于傳統(tǒng)純培養(yǎng)及宏基因組文庫(kù)方法研究海洋來(lái)源蛋白酶及微生物多樣性基于傳統(tǒng)純培養(yǎng)及宏基因組文庫(kù)方法研究海洋來(lái)源蛋白酶及微生物多樣性捅要近年來(lái)，工業(yè)酶市場(chǎng)逐年增加，2 0 1 1 年其市場(chǎng)總值達(dá)3 5 億美元，且以每年6 ．1 ％的速度增長(zhǎng)。蛋白酶作為最為重要的工業(yè)酶之一，占到了整個(gè)工業(yè)酶市場(chǎng)的6 5 ％，且廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、洗滌、制革、化妝品等行業(yè)中。盡管已經(jīng)有大量關(guān)于蛋白酶的研究和應(yīng)

2、用的報(bào)道，尋找新型的功能特殊的蛋白酶仍然十分重要，特別是針對(duì)海洋水產(chǎn)蛋白的處理，需要特殊的蛋白酶以形成口感風(fēng)味等。目前，由于微生物具有生長(zhǎng)快速，穩(wěn)定且產(chǎn)酶能力強(qiáng)等特點(diǎn)，蛋白酶主要來(lái)源于微生物的發(fā)酵。而海洋中蘊(yùn)藏著巨大的微生物資源，這些資源沒(méi)有得到有效的開(kāi)發(fā)利用，是尋找新型生物資源的優(yōu)良場(chǎng)所。本文以海洋微生物資源為主要研究對(duì)象，通過(guò)傳統(tǒng)的微生物純培養(yǎng)方法和宏基因組學(xué)的方法，研究海洋來(lái)源的蛋白酶資源。主要研究?jī)?nèi)容包括以下三個(gè)方面：1 ) 篩

3、選南海沉積物中產(chǎn)蛋白酶微生物并對(duì)南海微生物多樣性進(jìn)行初步分析：共篩選了南海2 3 個(gè)位點(diǎn)的產(chǎn)蛋白酶微生物共獲得7 6 株產(chǎn)蛋白酶微生物，其中有高溫菌( 5 0 ℃) 2 7 株，常溫菌( 2 8 ℃) 3 4 株，低溫菌( 1 0 ℃) 1 5 株。微生物1 6 S鑒定顯示己篩選的產(chǎn)酶菌株主要包含芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、放線菌屬等。微生物多樣性通過(guò)擴(kuò)增1 6 S V 4 區(qū)并測(cè)序分析，1 9 個(gè)不同位點(diǎn)的南海樣品，平均獲得3 5 8 7

4、 條有效片段，平均O T U 聚類數(shù)為1 4 9 2 ，說(shuō)明該區(qū)域具有大量的微生物資源。在所有的微生物，主要為變形菌門和泉古菌門，其次為浮霉菌門和厚壁菌門等。同時(shí)，微生物群落的0 【．多樣性和B ．多樣性分析也表明南海1 9 個(gè)不同位點(diǎn)的微生物多樣性具有較大的差異。2 ) 分離純化了微球菌N H 5 4 P C 0 2 所產(chǎn)的堿性蛋白酶并研究了酶學(xué)性質(zhì)及其在水產(chǎn)品上的應(yīng)用：純化的步驟共三步，包括：硫酸銨沉淀，D E A E ．弱陰離子交