共振光散射技術(shù)在藥物與核酸分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、光散射技術(shù)自其建立以來(lái)，經(jīng)過(guò)不斷的完善和發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于高分子聚合物科學(xué)，膠體科學(xué)及生命科學(xué)的研究中。1993年，Pasternack等通過(guò)在普通的熒光分光光度計(jì)上測(cè)定散射光信號(hào)建立了共振光散射(RLs)技術(shù)，該技術(shù)由于具有操作上的簡(jiǎn)便性和高度的靈敏性已引起人們的廣泛關(guān)注，并成功應(yīng)用于分析化學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。但是，共振光散射采用單一波長(zhǎng)處的強(qiáng)度作為其表征手段容易受外界因素的干擾，導(dǎo)致信號(hào)不穩(wěn)定，因此，有必要進(jìn)一步發(fā)展共振光散射技術(shù)，克

2、服其缺陷，擴(kuò)展其應(yīng)用范圍。本文在研究普通光散射的基礎(chǔ)上，提出了雙波長(zhǎng)散射/熒光比率法，并用于生物大分子的分析測(cè)定。研究?jī)?nèi)容包括下列三個(gè)方面： (1)在pH 4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，環(huán)丙沙星與四苯硼鈉作用在385.0 nm處產(chǎn)生的特征光散射信號(hào)(Ls)能應(yīng)用普通熒光分光光度計(jì)檢測(cè)，從而建立了環(huán)丙沙星的光散射分析法。增強(qiáng)的光散射強(qiáng)度(△I<,LS>)與0.03～0.2μg/mL，0.2～2.5μg/mL 兩個(gè)范圍內(nèi)的環(huán)丙沙星

3、溶液呈線性關(guān)系，檢出限分別為7.4 ng/mL，2.7 ng/mL。本實(shí)驗(yàn)中研究了酸度、聚乙二醇600溶液的濃度、四苯硼鈉溶液的濃度以及共存物質(zhì)對(duì)LS強(qiáng)度的影響。與藥典使用的高效液相色譜(HPLC)方法對(duì)照，結(jié)果表明LS方法可用于鹽酸環(huán)丙沙星片劑中環(huán)丙沙星含量的測(cè)定。 (2)在十二烷基苯磺酸鈉(sDBS)膠束體系中，AgNO<,3>與I<'->生成穩(wěn)定的AgI膠體，在437.0 nm處產(chǎn)生增強(qiáng)的共振光散射(RLS)信號(hào)，其增強(qiáng)的

4、共振光散射強(qiáng)度(△I<,RLS>)與0.03～4.4μg/mL范圍內(nèi)的I<'->溶液呈線性關(guān)系，由此建立測(cè)定I<'->的靈敏方法，檢出限為2.6 ng/mL。此方法用于合成樣的測(cè)定，回收率在99.3-106.7％之間，RSD小于2.8％。 (3)在pH 9.62的BR緩沖溶液中，陽(yáng)離子染料吖啶橙(AO)與魚(yú)精DNA(fsDNA)通過(guò)靜電作用形成二元復(fù)合物，導(dǎo)致AO在激發(fā)波長(zhǎng)272.0 nm處，產(chǎn)生增強(qiáng)的散射光，而在發(fā)射波長(zhǎng)534