PS修飾姜黃素納米脂質(zhì)載體的制備、表征及體外抗炎藥效學(xué)研究.pdf

1、目前，動脈粥樣硬化性心血管疾病已成為威脅人類健康的重大疾病之一。目前臨床上常用的抗動脈粥樣硬化藥物如他汀類、貝特類等雖然降血脂效果明顯，但不良反應(yīng)較多，如他汀類會引起橫紋肌的溶解等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素（curcumin， Cur）具有抗炎、抗氧化、抗凝血、清除自由基、降血脂等多方面抗動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的藥理作用，而且毒性低、不良反應(yīng)少，成為研究的熱點。
　　據(jù)文獻(xiàn)報道，磷脂酰絲氨酸（phosp

2、hatidylserine, PS）大量存在于凋亡細(xì)胞的外膜，能高效識別巨噬細(xì)胞上的受體而實現(xiàn)巨噬細(xì)胞靶向性，誘導(dǎo)生物體內(nèi)凋亡細(xì)胞的清除，而巨噬細(xì)胞又是AS斑塊的主要炎癥細(xì)胞。因此本課題擬采用生物內(nèi)源性的PS為膜材對納米脂質(zhì)載體進行修飾，通過簡單的物理結(jié)合，以具有明顯抗炎作用的Cur為模型藥物進行包載，制備PS修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體。期望不僅可以提高姜黃素的水溶性和穩(wěn)定性，還可以借助PS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞靶向作用增加納米脂質(zhì)載體在巨噬細(xì)胞

3、的聚集，同時借助于藥物與載體的協(xié)同作用，更好地發(fā)揮抗炎療效。
　　目的:制備PS修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體（curcumin-loaded nanostructured lipid carriers, Cur-NLC），對其處方和制備工藝進行優(yōu)化，并對其理化性質(zhì)進行考察，然后對載體及制劑的安全性進行評價，并對藥物與載體的體外協(xié)同抗炎藥效學(xué)進行研究。
　　方法:本文首先確定磷脂酰絲氨酸的摩爾比例，即磷脂酰絲氨酸的修飾程度，在此基

4、礎(chǔ)上分別制備了不同磷脂酰絲氨酸修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體。采用薄膜分散法制備Cur-NLC，以粒徑和包封率為評價指標(biāo)，采用單因素和正交實驗設(shè)計優(yōu)化其處方和制備工藝；采用透射電鏡觀察Cur-NLC的外觀形態(tài)，激光粒度分析儀測定其粒徑、粒徑分布及Zeta電位，透析法測定Cur-NLC的體外釋放行為；采用溶血實驗和細(xì)胞毒實驗考察載體及制劑的安全性；采用激光共聚焦掃描顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察載體對巨噬細(xì)胞的靶向性；通過油紅O染色觀察和總膽固醇的含量

5、測定來評價Cur-NLC對巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取行為的影響；采用反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）研究Cur-NLC對巨噬細(xì)胞致炎因子和抗炎因子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果:在優(yōu)化條件下制備的不同磷脂酰絲氨酸摩爾比例修飾的Cur-NLC外觀呈球形或類球形，平均粒徑均在200 nm左右，粒徑分布均勻；隨著磷脂酰絲氨酸修飾程度的增加，Cur-NLC的表面負(fù)電位逐漸下降；包封率均大于80％；載藥量均大于2

6、%；體外釋放行為顯示Cur-NLC具有明顯的緩釋特性，體外釋藥曲線方程擬合結(jié)果表明，不同磷脂酰絲氨酸修飾的Cur-NLC的體外釋放曲線均符合一級動力學(xué)模型。溶血實驗結(jié)果表明，不同磷脂酰絲氨酸修飾的Cur-NLC的溶血率均小于5%，說明載體材料血液相容性良好。MTT結(jié)果顯示，實驗中所用的載體和制劑均沒有細(xì)胞毒性。巨噬細(xì)胞靶向攝取實驗結(jié)果表明，PS的修飾比例為8%時，巨噬細(xì)胞對Cur-NLC有最大攝取。油紅O染色和細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量測定結(jié)果顯

7、示，PS空白載體組對巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取無明顯影響，姜黃素溶液組能顯著抑制巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)沉積，而兩者結(jié)合后其抑制能力顯著增強，可能是由于PS增加了姜黃素的巨噬細(xì)胞靶向性。RT-PCR和ELISA實驗結(jié)果顯示，PS空白載體組和姜黃素溶液組均能在基因和蛋白水平上抑制巨噬細(xì)胞致炎因子（MCP-1、TNF-α和IL-6）的分泌，促進抗炎因子（TGF-β和IL-10）的合成，而兩者結(jié)合后，該調(diào)節(jié)作用進一步增強，表明PS和姜黃素具有協(xié)同的抗炎作用。

8、r>　　結(jié)論:本文建立了姜黃素納米脂質(zhì)載體含量測定的體外分析方法，線性關(guān)系良好，靈敏度高。采用薄膜分散法制備Cur-NLC，微柱離心法測定包封率，優(yōu)化條件下制備的Cur-NLC，粒徑較小且分布均勻，包封率和載藥量均良好。穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明，納米脂質(zhì)載體在4℃條件下放置一周性質(zhì)穩(wěn)定。溶血實驗表明，不同的Cur-NLC制劑血液相容性均良好。MTT結(jié)果顯示，實驗濃度下不同PS修飾的Cur-NLC對細(xì)胞均安全無毒。藥物與載體的協(xié)同抗炎藥效學(xué)結(jié)果