蟲草素釕(Ⅱ)配合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究.pdf

1、自1969年順鉑的抗癌活性被發(fā)現(xiàn)以來，鉑類抗癌藥物的研究和應(yīng)用得到了迅速的發(fā)展，金屬配合物的藥用性引起了人們的廣泛關(guān)注，開辟了金屬配合物抗腫瘤藥物研究的新領(lǐng)域。在過去的30多年，藥物化學(xué)家尋找了多種方法來提高鉑類化合物的抗腫瘤活性和減低毒副作用及克服耐藥性，隨著中藥配位化學(xué)的興起，人們發(fā)現(xiàn)一些中藥活性成分的金屬配合物具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。將中藥活性成分與金屬的作用機(jī)理相結(jié)合，發(fā)揮中藥活性成分和金屬離子的雙功能是創(chuàng)新藥物的一條途徑。在這樣

2、的背景下，本研究組在眾多對(duì)金屬配合物配位特性、藥理活性和作用機(jī)制研究的基礎(chǔ)上，將抗腫瘤療效確切的中藥活性成分蟲草素和國際上已獲承認(rèn)的高效低毒的過渡金屬釕相結(jié)合，合成一種高效、低毒、低耐藥性新型抗癌藥—蟲草素釕(Ⅱ)配合物。
　　 目的：通過細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)，研究蟲草素釕(Ⅱ)配合物的抗癌活性，初步探討抗癌作用的分子機(jī)制。
　　 方法：⑴選取人肺腺癌細(xì)胞A549、人肝癌細(xì)胞Bel—7402、小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16為研究對(duì)象，進(jìn)

3、行藥物實(shí)驗(yàn)。⑵MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率及體外腫瘤藥敏性比較Hochest33258熒光染色觀察凋亡小體倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。⑶AV/PI雙染檢測(cè)早期凋亡及凋亡率Westernblot檢測(cè)P53蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：①M(fèi)TT結(jié)果顯示：Cor—Ru(Ⅱ)配合物都能抑制三種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系；體外腫瘤藥敏性比較發(fā)現(xiàn)，Cor—Ru(Ⅱ)配合物對(duì)Bel—7402細(xì)胞的抑制作用最為顯著，50μg/m藥物作用細(xì)

4、胞48小時(shí)后，Bel—7402細(xì)胞的抑制率達(dá)到60.7％。②相差倒置顯微鏡下觀察，正常對(duì)照組Bel—7402細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好，呈梭狀、梭形或三角形生長(zhǎng)，偽足伸長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)增多，可見典型的細(xì)胞分裂相，形成集落，并出現(xiàn)多細(xì)胞融合現(xiàn)象。Cor—Ru(Ⅱ)配合物干預(yù)后，細(xì)胞形態(tài)隨藥物濃度與孵育時(shí)間的增加發(fā)生明顯改變，偽足變短，細(xì)胞變圓，黏附性降低，部分漂浮于培養(yǎng)液中，逐漸出現(xiàn)一系列細(xì)胞凋亡特征性的形態(tài)學(xué)變化。③Hoechst33258熒光染色檢測(cè)

5、時(shí)，在熒光顯微鏡下可觀察到對(duì)照組Bel—7402細(xì)胞核發(fā)藍(lán)色熒光，染色質(zhì)均勻分布，Cor—Ru(Ⅱ)配合物干預(yù)后，細(xì)胞核體積變小，染色質(zhì)致密濃染，或呈顆粒狀塊或月牙形致密濃染。④流式細(xì)胞儀PI單染結(jié)果顯示：Cor—Ru(Ⅱ)配合作用于Bel—7402肝癌細(xì)胞48h后，G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期比例明顯減少，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01)。⑤流式細(xì)胞儀AV/PI雙染結(jié)果顯示：Cor—Ru(Ⅱ)配合作用Bel—7402肝癌細(xì)胞

6、48h后，細(xì)胞早期凋亡發(fā)生率明顯增高，與對(duì)照組相比，R×C表卡方檢驗(yàn)差異有顯著性(P<0.01)。50ug/ml藥物作用細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞早期凋亡率達(dá)27.4％，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。⑥Western blot結(jié)果顯示Cor—Ru(Ⅱ)配合物明顯促進(jìn)Bel—7402細(xì)胞P53表達(dá)。
　　 結(jié)論：⑴蟲草素釕(Ⅱ)配合物使A549、Bel—7402、B16細(xì)胞增殖受到抑制，以作用Bel—740細(xì)胞的抑制效果最佳