銀杏葉多糖抗氧化活性及對肝癌HepG2細胞誘導凋亡作用的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌具有發(fā)病隱秘、病程漫長、病死率較高等特點，是一種嚴重危害人類健康的惡性腫瘤病。目前，對于原發(fā)性肝癌的治療主要采取姑息性手術治療、化學藥物治療等方法，雖然這些方法具有一定的治療效果，但同時具有高風險、毒副作用大、對機體損傷嚴重等弊端。因此，現(xiàn)在亟需挖掘出效果良好的毒副作用小的天然抗腫瘤藥物并應用到臨床治療，這些藥物的開發(fā)必將對惡性腫瘤病的防控具有重大的現(xiàn)實意義。眾多研究表明，抗腫瘤作用是植物活性多糖的一個重要的生物學活性。因此，

2、本研究以肝癌腫瘤HepG2細胞為指示細胞，系統(tǒng)研究了銀杏葉多糖（GBLP）對HepG2細胞增殖抑制作用及誘導凋亡的分子機制，實驗結果如下：
　　本研究首先利用水提醇沉法提取GBLP，經(jīng)過脫色、脫蛋白、透析等處理獲得了純度較高的GBLP，苯酚硫酸法測得多糖含量為82.60％；紅外光譜分析顯示GBLP含有多糖類物質(zhì)的特征性吸收峰；體外抗氧化試驗表明GBLP對DPPH?、O2-?自由基及 H2O2具有較強的清除能力，對鐵離子具有一定的還

3、原能力，說明了GBLP具有較好的體外抗氧化活性，并與多糖濃度呈正相關關系。
　　本研究利用不同濃度的GBLP溶液與HepG2共孵育48h，MTT試驗結果顯示，當GBLP溶液的濃度達到1400μg/ml時，GBLP對HepG2的抑制率達到了37.42%。運用流式細胞技術檢測了細胞的凋亡率，當GBLP溶液的濃度達到1400μg/ml時，細胞凋亡率達到了13.3%。以上結果表明GBLP對HepG2增殖具有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴效應

4、。采用免疫印跡技術（Western Blot）分析了細胞凋亡關鍵酶caspase-9、caspase-3、PARP的表達情況，并檢測了Bcl-2及Bax蛋白的翻譯水平和致癌蛋白Mutant-p53的表達量，結果表明，GBLP可有效的激活caspase-9、caspase-3以及切割PARP來促進HepG2的凋亡；下調(diào)Bcl-2和上調(diào)Bax的表達量來進一步誘導線粒體的損傷；減少致癌蛋白Mutant-p53的表達。綜上，GBLP對HepG2