羥基積雪草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪復(fù)供損傷的保護(hù)機(jī)制.pdf

1、腦缺血是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，致死致殘率極高。缺血腦組織在恢復(fù)血液灌注后損傷進(jìn)一步加重的臨床病理過程即為缺血再灌注損傷（I/R）。缺血再灌注損傷中存在一系列的腦組織損傷和細(xì)胞致死過程，其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明，目前無特效治療藥物。多種因素所導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞激活可引發(fā)腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)，在腦缺血發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可參與神經(jīng)元的退變過程，因此以小膠質(zhì)細(xì)胞為靶標(biāo)，研究抑制其激活和炎性因子產(chǎn)生的藥物已成為腦缺血治療

2、藥物開發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。
　　中藥提取物羥基積雪草苷（MA）具有抗炎、抗氧化、促進(jìn)傷口愈合等廣泛的藥理學(xué)活性，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)已證實(shí)MA可以減小腦缺血/再灌損傷大鼠的皮層梗死面積，減輕神經(jīng)功能損傷，并且發(fā)現(xiàn)這種保護(hù)作用可能與其抑制中樞炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，但具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入探討。本研究擬在前期基礎(chǔ)上，結(jié)合體外氧糖剝奪復(fù)供（OGD/R）模型，進(jìn)一步觀察MA對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、TLR4/MyD88信號(hào)通路及其下游分子 NF-κB介導(dǎo)的炎

3、癥損傷的作用，從“信號(hào)通路－小膠質(zhì)細(xì)胞－神經(jīng)炎癥”展開研究，以期闡明羥基積雪草苷抗腦缺血炎癥損傷機(jī)制，為新藥開發(fā)及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　目的：研究羥基積雪草苷（MA）對(duì)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞OGD/R損傷的保護(hù)作用，研究羥基積雪草苷對(duì)OGD/R及LPS誘導(dǎo)炎癥損傷的抑制作用，探討羥基積雪草苷是否通過調(diào)節(jié)TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路，降低炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：建立小膠質(zhì)細(xì)胞BV2小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖

4、剝奪/復(fù)供（OGD/R）的體外模型。實(shí)驗(yàn)分組分為OGD/R+MA（50μM）、OGD/R+MA（100μM）、OGD/R+MA（200μM）、OGD/R組及空白對(duì)照組。建立LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥損傷模型，實(shí)驗(yàn)分組分為L(zhǎng)PS+MA（200μM）、LPS組及空白對(duì)照組。MTT法和光鏡檢測(cè)觀察小膠質(zhì)細(xì)胞活力和激活狀態(tài)；RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNFα、TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA表達(dá)情況；ELISA

5、檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-1β、IL-6和TNFα蛋白的表達(dá)情況；免疫熒光技術(shù)檢測(cè)TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表達(dá)及定位情況；Western Blot定量檢測(cè)TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表達(dá)水平變化。
　　結(jié)論：羥基積雪草苷（MA）對(duì) BV2小膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪復(fù)供損傷有較好的神經(jīng)保護(hù)作用，其機(jī)制可能通過下調(diào)TLR4/MyD88信號(hào)通路的表達(dá)，抑制下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)，進(jìn)一步降低受NF-κB調(diào)控的炎性因子表