羥基積雪草苷體內(nèi)外抗輻射損傷及機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究羥基積雪草苷(madecassoside,MC)體內(nèi)外抗輻射作用及其機(jī)制。
　　方法:①NIH3T3正常細(xì)胞株,采用60Coγ15Gy(每分鐘照射2 Gy)劑量輻射造成細(xì)胞損傷模型,用MTT法觀察 MC對輻射造成細(xì)胞損傷的保護(hù)作用;鄰苯三酚自氧化法被用來產(chǎn)生超氧陰離子自由基O2-,使用酶標(biāo)儀測定MC清除超氧陰離子O2-自由基的清除率;使用總SOD活性檢測試劑盒(NBT法)檢測給藥輻射后,細(xì)胞裂解液中SOD水平;使用細(xì)胞周

2、期試劑盒和細(xì)胞凋亡試劑盒考察MC在不同濃度下或者不同時(shí)間點(diǎn)對輻射后細(xì)胞周期和凋亡的作用。②建立X射線10Gy劑量下小鼠損傷模型,記錄小鼠體重變化;測定脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù);用MTT方法測定脾淋巴細(xì)胞增殖;蘇木素伊紅(hematoxylin and eosim,HE)染色,借助于相應(yīng)的損傷評分方法考察MC對輻射造成小鼠小腸損傷的保護(hù)作用。
　　結(jié)果:①M(fèi)TT結(jié)果顯示,MC的3個(gè)濃度(15μg/mL、7.5μg/mL、3.75μg/mL

3、)均對輻射后的NIH3T3細(xì)胞有保護(hù)作用,而在1.88μg/mL時(shí)顯示沒有效果;MC濃度在2.0mg/mL時(shí),對O2-自由基的清除率達(dá)到44％,但低于同濃度的陽性對照抗壞血酸(VC)(74％);MC濃度在120μg/mL,60μg/mL,30μg/mL能提高細(xì)胞裂解液中SOD水平,但在15μg/mL時(shí)不能顯著提高該水平;輻射后48小時(shí),與模型組細(xì)胞相比,MC(7.5μg/mL,3.75μg/mL)能夠使細(xì)胞S期時(shí)長延長,G2期和SubG

4、1期減少,從S期到G2期順利過渡,緩解了細(xì)胞周期的阻滯。細(xì)胞分別輻射后24小時(shí)、48小時(shí),與模型組相比,15μg/mL的MC可以逆轉(zhuǎn)輻射引起的細(xì)胞凋亡,并使細(xì)胞達(dá)到或接近正常狀態(tài)。②10Gy輻射后9天內(nèi),MC未能阻止接受輻射的小鼠體重的下降;在輻射后第8天,MC可以提高大部分受輻射小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù);MC大劑量組(25mg/kg)能提高脾淋巴細(xì)胞增殖活力;形態(tài)學(xué)觀察MC能夠使輻射后(5小時(shí)、第2天和第8天)的小鼠小腸上皮組織結(jié)構(gòu)趨