PPARα-δ-γ基因單核苷酸多態(tài)性與平均動脈壓、脈壓的關聯(lián)研究.pdf

1、過氧化物酶體增殖物激活型受體（Peroxisome Proliferators-Activated Receptors，PPARs）屬于配體激活的轉錄因子，在抗炎、脂質代謝、糖穩(wěn)態(tài)、細胞增殖和分化中均扮演重要角色。PPARs在不同物種發(fā)現(xiàn)三種亞型，α、δ及γ亞型的位置為22、6及3號人類染色體。既往的研究已經證實，PPARα/δ/γ的單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）與高血壓、糖尿

2、病、血脂異常、肥胖等均顯著關聯(lián)。平均動脈壓（Mean Arterial Pressure，MAP）和脈壓（Pulse Pressure，PP）是動脈彈性的兩個重要的表型指標，是心腦血管疾病發(fā)生的獨立危險因子。單位點關聯(lián)分析、GWAS分析和 Meta分析等研究結果顯示，一些代謝相關的基因如 ATP2B1的rs17249754和rs2681492等的SNPs與MAP和PP的關系密切。
　　迄今為止，PPARs基因的SNPs與MAP和P

3、P的關聯(lián)仍不清楚且缺乏可靠的人群證據(jù)。Ryan等報道PPARγ配體羅格列酮可降低轉基因小鼠的MAP水平。此外，通過對94名代謝綜合征患者的研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ C-161T基因CC型攜帶者的PP水平明顯高于CT+TT型患者。我們的研究立足于江蘇省關于代謝綜合征及多代謝異常的防治的隊列研究，本研究從PPARα、δ、γ三個亞型的SNPs的單位點、基因-基因交互作用、單體型、單體型-環(huán)境交互作用四個層次，系統(tǒng)探討并闡明PPARs基因SNPs與

4、MAP和PP發(fā)生發(fā)展的關聯(lián)，旨在為心血管疾病的病因研究和防控研究提供新的科學證據(jù)。
　　第一部分：PPARs基因的SNPs與MAP和PP的關聯(lián)分析
　　目的：探討PPARα/δ/γ基因10個SNPs與MAP、PP之間的關聯(lián)。
　　方法：采用單純隨機抽樣方法，本研究立足于江蘇省代謝綜合征和多代謝異常綜合防治研究，從PMMJS隊列研究中，隨機抽取研究對象820例，男性270例，女性550例。根據(jù)次要等位基因頻率≥5％、與多

5、代謝異常有關聯(lián)和位于基因片段功能區(qū)或者可能改變功能的區(qū)域三個標準，選取用于本研究的3個PPARα、2個PPARδ和5個PPARγ的SNPs位點并進行檢測，并采用SNP Assoc program分析PPARs基因10個SNPs與MAP、PP的關聯(lián)。
　　結果：（1）樣本群體代表性分析：本研究通過對選取的PPARα/δ/γ三亞型的10個 SNPs開展哈溫檢驗分析，提示對頻數(shù)期望值和實際值比較發(fā)現(xiàn)，本研究選擇的SNPs位點的基因型差異

6、沒有統(tǒng)計學意義，說明本研究對象處于分布均勻狀態(tài)。
　?。?）PPARs的SNPs與 MAP的關聯(lián)分析：與野生型攜帶者相比，PPARα的rs135539突變基因型（AC+CC）和PPARδ的rs9794的突變基因型（CG+GG）攜帶者的MAP分別變化-2.200 mmHg（95%CI：-3.677--0.722 mmHg）和-1.579 mmHg（95%CI：-3.069--0.089 mmHg），而PPARγ的rs10865710

7、的突變基因型（CG+GG）攜帶者的MAP水平顯著升高1.565mmHg（95%CI：0.096-3.033mmHg）。
　?。?）PPARs的SNPs與PP的關聯(lián)分析：PPARγ的rs1805192的突變基因型（PA+AA）攜帶者與野生型（PP）相比，PP水平顯著變化1.341 mmHg（95% CI：0.431-2.252 mmHg）。
　　結論：PPARα的rs135539、PPARδ的rs9794與PPARγ的rs10

8、865710三個SNPs與MAP顯著相關，而PPARγ的rs1805192位點與PP顯著關聯(lián)。
　　第二部分：基于PPARs基因的SNPs的基因-基因交互作用與MAP和PP的關聯(lián)分析
　　目的：在PPARs基因的SNPs與MAP和PP的關聯(lián)分析基礎上，明確PPARs的10個SNPs之間的基因-基因交互作用與MAP、PP的關聯(lián)。
　　方法：應用Haploview軟件對10個SNPs進行連鎖不平衡檢驗。對PPARs的10個

9、SNPs之間開展廣義多因子降維法（GMDR）的交互作用分析，評估各維度交互作用的質量并確定最佳模型。
　　結果：（1）連鎖不平衡檢驗：檢驗對象為PPARs位于同一條染色體上10個SNPs，D'值均小于0.75，提示10個SNPs兩兩間的連鎖不平衡狀態(tài)不顯著。故在各SNPs相對獨立遺傳的基礎上，可以分析SNPs之間的基因-基因交互作用。
　?。?）PPARs基因SNPs的基因-基因交互作用與MAP的關聯(lián)分析：GMDR模型統(tǒng)計結

10、果顯示，二階和八階交互作用模型與MAP（≥70 mmHg）顯著相關，其中PPARα基因的rs135539，PPARδ的rs9794和rs2016520兩個SNPs，PPARγ的rs3856806、rs4684847、rs1805192、rs709158和rs10865710五個SNPs的八階模型平均檢驗準確度是0.605，交叉驗證一致性是10/10，為與MAP有關聯(lián)的最優(yōu)模型。
　?。?）PPARs基因SNPs的基因-基因交互作用

11、與PP的關聯(lián)分析：GMDR模型分析結果顯示，在PP≥30 mmHg的亞組中，PPARα基因的rs135539、PPARδ的rs2016520、PPARγ的rs10865710、rs1805192、rs709158、rs3856806組成的六階模型交叉驗證一致性是10/10，平均檢驗準確度是0.577，是最優(yōu)模型。而在PP≤40 mmHg的亞組中，二階交互作用模型與PP顯著相關，平均檢驗準確度是0.628，交叉驗證一致性是10/10。

12、r>　　結論：PPARs基因的rs135539、PPARδ的rs9794和rs2016520、PPARγ的rs3856806、rs1805192、rs10865710、rs709158及rs4684847八個SNPs間存在與MAP相關的基因-基因交互作用。PPARα基因的rs135539、PPARδ的rs2016520和PPARγ的rs10865710、rs1805192、rs709158、rs3856806六個SNPs間基因-基因交互

13、作用與PP間具有顯著性關聯(lián)。
　　第三部分：構建PPARs基因的SNPs的單體型及其與MAP和PP的關聯(lián)分析
　　目的：根據(jù) GMDR模型的分析結果，對位于同一條染色體上的PPARs基因的SNPs間構建單體型，分析構建的單體型與MAP和PP的關聯(lián)。
　　方法：根據(jù)GMDR的分析結果，分別有2個PPARδ基因的SNPs和6個PPARγ基因的SNPs存在與MAP和PP的交互作用，而PPARα基因只有1個SNP存在與其他基因

14、位點的交互作用。因此，本研究中采用R語言分析軟件的Haplo.stats程序包，在GMDR分析顯著模型中同一亞型（PPARδ和PPARγ）的SNPs的基礎上進行單體型的構建，經協(xié)變量調整后，分別探討PPARδ單體型與MAP的關聯(lián)，PPARγ單體型與MAP的關聯(lián)以及PPARγ單體型與PP的關聯(lián)。
　　結果：（1）PPARδ的單體型與MAP的關聯(lián)分析：單體型T-C攜帶人群的MAP水平顯著升高，單體型分數(shù)為2.209（P=0.027）。

15、
　?。?）PPARγ的單體型與MAP的關聯(lián)分析：攜帶單體型G-P-C-G-C、G-P-C-A-T、G-P-T-A-C、G-P-T-G-T的人群與MAP（≥70 mmHg）相關，單體型分數(shù)分別為-2.283、1.992、2.038和2.713；P值分別為0.022、0.046、0.042和0.007。
　?。?）PPARγ的單體型與PP的關聯(lián)分析：攜帶單體型G-P-A-T的人群與PP（≥30 mmHg）相關，單體型分數(shù)為2.

16、348，P值為0.019。
　　結論： PPARδ的單體型 T-C和 PPARγ的單體型 G-P-C-A-T、G-P-T-A-C、G-P-T-G-T、G-P-C-G-C也許為調控MAP的基因遺傳標記，而PPARγ的單體型G-P-A-T也許為調控PP的基因遺傳標記。
　　第四部分：PPARs單體型-環(huán)境交互作用與MAP和PP的關聯(lián)分析
　　目的：研究PPARδ和PPARγ的不同的單體型與體質指數(shù)（BMI）、腹型肥胖（WC

17、）、吸煙之間的基因-環(huán)境交互作用與MAP、PP的關聯(lián)。
　　方法：采用R軟件的Haplo.stats程序包的Haplo.glm程序建立基因-環(huán)境交互作用模型，分別探討PPARδ和PPARγ的不同單體型與BMI、WC和吸煙之間的交互作用與MAP和PP之間的關聯(lián)。
　　結果：（1）PPARδ單體型與BMI、WC和吸煙之間的交互作用與MAP的關聯(lián)分析：研究結果發(fā)現(xiàn)，PPARδ單體型T-C與BMI、WC和吸煙之間的交互作用與MAP（

18、≥70 mmHg）間的相關性無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　?。?）PPARγ單體型與BMI、WC和吸煙之間的交互作用與MAP的關聯(lián)分析：PPARγ的C-A-C-G-T、C-A-T-G-T、C-P-C-A-C、C-P-C-G-C、G-A-C-A-T、G-A-T-G-T、G-P-C-G-T、G-P-T-A-C、G-P-T-A-T九個單體型與BMI的交互作用與MAP（≥70 mmHg）顯著關聯(lián)；PPARγ的C-A-C-G-T、C-P

19、-C-A-C、C-P-T-G-C、G-A-C-A-T、G-A-T-G-T、G-P-C-G-T、G-P-T-A-T單體型與WC的交互作用與MAP（≥70 mmHg）存在關聯(lián)；PPARγ的C-A-C-G-T、C-P-T-G-T、G-A-T-A-C、G-A-T-A-T、G-P-C-G-T單體型與吸煙的交互作用對MAP（≥70 mmHg）具有顯著的影響。
　　（3）PPARγ單體型與BMI、WC和吸煙之間的交互作用與PP的關聯(lián)分析：PPA